Análisis de la integridad genómica de espermatozoides coincubados con medio condicionado de tejido oviductal humano

M. CELESTE ROBERT; ADRIANA CAILLE; MARÍA JOSE MUNUCE; SERGIO GHERSEVICH

Mar del Plata

Encuentro; L Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clinica (SAIC); 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clinica (SAIC)

Análisis de la integridad genómica de espermatozoides coincubados con medio condicionado de tejido oviductal humano. Robert, María Celeste; Caille, Adriana; Munuce, María; Ghersevich, Sergio. Laboratorio de Estudios Reproductivos, Área Bioquímica Clínica, Fac. de Cs. Bioq. y Farmac., UNR. Durante el proceso de capacitación los espermatozoides (esp) generarían especies reactivas del oxígeno (ERO) involucradas en los pasos iniciales del mismo, aunque su exceso también puede dañar estructuras espermáticas. La secreción oviductal podría modular la acción de las ERO. En este trabajo evaluamos la integridad genomica de esp incubados en condiciones capacitantes (CAP) en presencia o ausencia de secreción de tejido oviductal. El tejido, obtenido de pacientes (n=5) premenopausicas sometidas a histerectomía por causas no oncologica, se cultivo en medio Ham-F12/DMEM (48 h, 37° C, 5% CO2) colectandose el medio condicionado (MC). Los esp mótiles de donantes normozoospermicos (seleccionados por gradiente de Percoll, n=5) se incubaron en CAP durante 4 y 22 h, con o sin MC, [proteínas] MC= 0.2ug/ul. La viabilidad de los esp se evaluó con Eosina Y (según OMS). La integridad del ADN espermático se evaluó mediante el ensayo del cometa, mediante electroforesis en condiciones alcalinas. Se midió la distancia de migración del ADN en um (DM) teñido con plata, evaluándose 200 células por tratamiento. Los datos se expresaron como media +/- SEM y se analizaron por ANOVA. En ausencia del MC la viabilidad fue significativamente menor luego de 22 h en CAP respecto de la suspensión post Percoll (76.7 +/- 4.5 % vs. 90.7 +/- 2.5 %; p