INVESTIGADORES
BIANCO Maria Isabel
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de neurotoxinas botulínicas mediante hemoaglutinación y unión a gangliósidos
Autor/es:
LÚQUEZ C, SAGUA MD, BIANCO MI, FERNÁNDEZ RA
Lugar:
Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Jornada; XI Jornadas Argentinas de Microbiología. II Jornadas de Microbiología e Infectología del Sur Argentino; 2005
Resumen:
Las neurotoxinas botulínicas (NTBo) son polipéptidos de 150-kDa producidas por Clostridium botulinum durante la fase de crecimiento logarítmico. Son liberadas al medio asociadas a proteínas no tóxicas, formando complejos precursores. Las NTBo tipo A, B, C, D y G pueden incluir hemaglutininas (HA) en dichos complejos. El tipo serológico de la NTBo, el origen de las cepas y el medio en que se las incuba podrían ser factores condicionantes en la producción de las NTBo precursora hemaglutinina positiva (NTBo/HA+). Se sabe que los receptores celulares gangliósidos están implicados en la unión neuroespecífica de la toxina, sin embargo, no se tiene una respuesta definitiva sobre el tipo y número de sitios de unión. EL receptor celular de la NTBo variaría de acuerdo al tipo serológico. El objetivo de este trabajo fue comparar la producción de NTBo/HA+  y la unión a gangliósidos de cepas de C. botulinum de diferentes tipos serológicos, aisladas de diversos orígenes, e incubadas en diferentes medios de cultivo. Se estudiaron 8 cepas de C. botulinum: seis de referencia (A-Hall, B-WH, C-London, D-África, E-Japón y F-Langeland), una aislada de suelo (A-M110) y una de botulismo del  lactante (A-BL10). Para la prueba de hemaglutinación, las cepas se cultivaron en: (1) Peptona-Extracto de levadura-Tripticasa (PET). La toxina se separó mediante centrifugación, se realizaron diluciones en base dos y se mezclaron con igual volumen de suspensión al 2% de glóbulos rojos. La cepa A-Hall se cultivó en: (1) PET suplementado con suspensión de arvejas, (2) Medio de Carne Picada (MCP), (3) Caldo Cerebro-Corazón (CCC), (4) Peptona-Extracto de levadura-Glucosa (PYG). La unión a gangliósidos humanos se determinó por cromatografía en capa delgada (TLC) y posterior inmunotinción. Las placas de TLC se incubaron con NTBo y anticuerpos primarios (antitoxinas) y secundario conjugado con peroxidasa. La cepa C-London produjo NTBo/HA con un título de 4 y la cepa D-África de 128. Las cepas A-M110, A-BL10, B-WH, E-Japón y F-Langeland fueron HA negativas. Cuando se estudió la producción de Ha en diferentes condiciones, la cepa A-Hall dio un título de: 128 en PET, 64 en PET + arvejas, 32 en PYG, 16 en CCC y 8 en MCP. La NTBo A-Hall sólo mostró unión a sulfátidos; A-BL10 se unió a GD1b, GD1a, GM1 y GA1; A-M110 a GD1a, GD1b, GM1, LM1, GA1 y sulfátidos; B-WH a GD1a y GM1; C-London se unió a GD1a, GD1b y GM1; D-África a GF1a, GM1 y LM1; E-Japón a GD1a y GM1 y F-Langeland a GD1a y GM1. La cepa A-Hall produjo diferentes títulos de HA en los distintos medios de cultivo empleados, por lo que el medio de cultivo sería un factor condicionante en la producción de NTBo/HA. Además, el origen de las cepas también condicionaría la producción de HA, debido a que las dos cepas autóctonas resultaron HA-, mientras que las tres cepas de referencia fueron HA+. Los distintos tipos serológicos mostraron diferente perfil de unión a gangliósidos. Sin embargo, dentro de un mismo serotipo también se observaron diferencias, debidas posiblemente a la presencia de HA en el complejo neurotóxico que interferiría en la unión específica.