Expresion del receptor tipo I del factor de crecimiento análogo a insulina en ovarios de animales con enfermedad quística ovárica bovina

COLOMBERO, M.; RODRIGUEZ F. M.; MATILLER V.; BEN¨ªTEZ, G.; ORTEGA H. H.; REY F.

Casilda

Jornada; XIII Jornadas de Divulgación Técnico Científicas en Ciencias Veterinarias 2012.; 2012

Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de Rosario

Expresión del receptor tipo I del factor de crecimiento análogo a insulina en ovarios de animales con enfermedad quística ovárica bovina. Colombero M1, Rodríguez FM1,2, Matiller V1, Benítez G1, Ortega HH1,2, Rey F1,2 1Laboratorio de Biología Celular y Molecular. Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional del Litoral 2Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas La Enfermedad Quística Ovárica (COD) es uno de los desórdenes reproductivos más frecuentes en vacas lecheras. Los quistes foliculares afectan a las vacas de alta producción durante el posparto, prolongando el período parto-concepción y ocasionando pérdidas significativas en la producción pecuaria (4). Se ha determinado que la progresión a través de los sucesivos estadios de desarrollo folicular requiere de una comunicación bidireccional entre el ovocito y las células de la granulosa, y entre estas últimas y las células de la teca (1). La regulación ocurre a varios niveles, con una contribución variable de factores endocrinos, autocrinos y paracrinos. Dentro de los mecanismos de modulación se encuentra el sistema de IGFs que participa activamente en la funcionalidad ovárica de diversas especies, regulando el desarrollo folicular y la esteroidogénesis, sea sólo o en sinergia con las gonadotrofinas. El sistema IGF está compuesto por dos ligandos (IGF-I e IGF-II), 6 proteínas de unión (IGFBPs), IGFBP-proteasas específicas y dos receptores (IGFR-I e IGFR-II). El receptor tipo 1 (IGFR-I) es un receptor de tipo tirosin-quinasa que se une con alta afinidad al IGF-I y en menor grado a IGF-II. Está compuesto por dos subunidades α que reconocen al ligando y dos subunidades β transmembranosas con actividad quinasa activada por el ligando, y sitios de autofosforilación (2). El IGF-I y sus receptores (IGFRs) cumplen funciones determinantes en la regulación del desarrollo folicular, por lo tanto podrían ejercer un rol importante en la patogénesis de la COD. Es por ello que en este trabajo nos propusimos evaluar la expresión proteica de IGFR-I en quistes foliculares espontáneos provenientes de animales a campo, inducidos experimentalmente y en folículos controles. Se utilizaron muestras de vacas con quistes espontáneos, obtenidas a campo, y muestras de animales experimentales, cuyos ciclos estrales fueron sincronizados previamente, y luego divididos en dos grupos. En uno de ellos, se indujo la enfermedad por medio de la administración de ACTH, y el otro se mantuvo como grupo control. Luego de la confirmación del desarrollo de quistes por ultrasonografía se realizó la ovariectomía y se obtuvieron muestras de ovarios (2) que fueron fijadas en formaldehído bufferado 4% y procesadas según protocolos de rutina hasta inclusión en parafina. Se efectuaron cortes de 4 m de espesor, sobre los que se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta específica para IGFR-I. Se realizó recuperación antigénica con buffer citrato en microondas, la inactivación de la peroxidasa endógena con agua oxigenada en metanol y el bloqueo de uniones inespecíficas con suero normal de cabra y se incubó con el anticuerpo primario específico. El revelado se realizó utilizando un anticuerpo secundario biotinilado y la reacción se visualizó utilizando 3,3´ diaminobencidina como cromógeno. Se evaluó la inmunomarcación en células de la granulosa y de la teca durante el crecimiento folicular y en estructuras quísticas sobre imágenes digitalizadas utilizando el programa de análisis de imágenes Image Pro-Plus 3.0. Se midió el porcentaje de área inmunomarcada para cada capa folicular y las diferencias obtenidas se analizaron estadísticamente con el programa SPSS para Windows 11.0.1. Los resultados obtenidos determinaron que el IGFR-I no se expresó en células de la teca, mientras que en células de la granulosa, se observó expresión citoplasmática en todas las estructuras foliculares analizadas. Se determinó un patrón de marcación creciente a medida que aumenta el desarrollo folicular. La expresión de IGFR-I fue significativamente mayor en folículos terciarios y quistes, con respecto a las demás estructuras foliculares (p menor 0.05). En todos los estadios foliculares analizados se observó una menor marcación en estructuras provenientes de COD inducida con respecto a los folículos provenientes de COD espontánea. Teniendo en cuenta que previamente en nuestro laboratorio observamos una disminución en la expresión de IGF-I (3) y basados en los resultados obtenidos en este trabajo, podríamos inferir que un aumento en la expresión de IGFR-I estaría relacionado a un incremento en las posibilidades de captar las menores concentraciones de IGF-I presentes en situaciones de animales con COD. De esta manera, los resultados obtenidos en el presente trabajo apoyan la hipótesis de un rol fundamental del sistema IGF, ayudando a una mejor compresión acerca de su participación en el desarrollo de la enfermedad. (1) Eppig,J. Oocyte control of ovarian follicular development and function in mammals. Reproduction 122: 829-838, 2001. (2) Giudice, L. Insulin-like growth factors and ovarian follicular development. Endocr Rev 13:641-669, 1992. (3) Ortega,H.H.; Palomar, M.M.; Acosta,J.C.; Salvetti,N.R.; Dallard,B.E.; Lorente,J..A; Barbeito,C.G.; Gimeno,E.J. Insulin-like growth factor I in sera, ovarian follicles and follicular fluid of cows with spontaneous or induced cystic ovarian disease. Res Vet Sci. 84:419-427, 2008. (4)Silvia,W.J.; Alter,T.B.; Nugent,A.M.; Laranja da Fonseca,L.F. Ovarian follicular cysts in dairy cows: an abnormality in folliculogenesis. Domest Anim Endocrinol 23:167-177, 2002.