INVESTIGADORES
MATILLER Valentina
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de la expresión del factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) e interleuquina 6 (IL-6) en muestras hepáticas de vacas lecheras durante el periodo de transición.
Autor/es:
IMVINKELRIED, J. P.; ANGELI, E.; BARCAROLO, D; BENZ, M; ORTIZ DE ZÁRATE, J; REY, F; SALVETTI, N; HEIN, G.; MATILLER, V.
Lugar:
Esperanza
Reunión:
Jornada; X Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión de la Facultad de Ciencias Veterinarias; 2022
Institución organizadora:
FCV-UNL
Resumen:
En los sistemas de producción de leche bovina actuales, las vacas sufren alteraciones metabólicas, principalmente durante el período de transición (PT). Este periodo transcurre desde tres semanas antes del parto hasta tres semanas posteriores al mismo y durante el mismo, las crecientes demandas de nutrientes y energía de los animales no pueden ser satisfechas a través de la ingesta de alimentos y conducen a una movilización grasa desde los tejidos del cuerpo. La excesiva liberación de ácidos grasos puede superar la capacidad metabólica del hígado y se asocia con enfermedades hepáticas como hígado graso o cetosis2. Además, el periparto de las vacas lecheras ha sido descripto como un período proinflamatorio caracterizado por enfermedades infecciosas frecuentes. Interleuquinas proinflamatorias como el factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) y la interleuquina 6 (IL-6) han sido señaladas como elementos importantes en el desarrollo de este estado inflamatorio.4 El objetivo de este trabajo es evaluar la expresión de TNF-α e IL-6 mediante inmunohistoquímica indirecta (IHQ) en muestras hepáticas obtenidas por biopsia.Se seleccionaron cinco vacas Holstein, de segunda a cuarta lactancia, de una granja lechera comercial en pastoreo en Hipatia (31°07´S, 61°03´W), Santa Fe, Argentina. Los animales fueron examinados clínicamente previo y durante el ensayo, y no mostraron evidencia de trastornos tales como retención de placenta, fiebre de leche clínica, mastitis, metritis, cetosis clínica, abomaso desplazado, cojera y/o trastornos gastrointestinales clínicos. En este estudio solo se incluyeron animales sanos. Se tomaron muestras de sangre de vena yugular y de biopsias hepáticas a los 21 (±3) días antes de la fecha prevista de parto, y 7 (±3) y 21 (±3) días posteriores al parto. Las biopsias de aproximadamente 500 mg de tejido hepático fueron obtenidas por punción según lo descripto por Angeli y col.1. Las muestras fueron fijadas en formaldehído tamponado al 4% durante 4-6 h y procesadas de acuerdo a las técnicas histológicas de rutina hasta su inclusión en parafina. Se efectuaron cortes seriados, de 4 μm de espesor con un micrótomo Leica R450, y se montaron en portaobjetos previamente tratados con 3-aminopropyl-triethoxysilane (Sigma, USA). Sobre estos cortes se realizó la técnica de IHQ indirecta para la determinación in situ de TNF-α e IL-6 mediante el empleo de anticuerpos específicos, para TNF-α: Mouse monoclonal 77830, MAB686 y Rabbit Polyclonal AHP852Z para IL-6. Brevemente, los cortes se desparafinaron, rehidrataron y se realizó recuperación antigénica, bloqueo de la actividad de peroxidasa endógena y de las uniones inespecíficas. Luego de la incubación con el anticuerpo primario, se utilizó un kit comercial de un anticuerpo secundario biotinilado, seguido de estreptavidina-peroxidasa (Cell Marque). Finalmente, la reacción fue revelada utilizando 3,3´ diaminobencidina (Dako) como cromógeno y las muestras contracoloreadas con hematoxilina. Las imágenes fueron obtenidas mediante un microscopio Óptico Nikon Eclipse y digitalizadas mediante una cámara Nikon conectada a una computadora de escritorio. La evaluación de la técnica de IHQ se realizó por análisis digital de imágenes, utilizando el sistema Image-Pro Plus 3.0.1 (Media Cybernetic), siguiendo métodos ya descritos3. Brevemente se evaluó el % de área marcada. Los datos obtenidos fueron evaluados mediante el programa estadístico SPSS 11.0.1 para Windows. Se realizó un análisis de la varianza de los datos obtenidos de la inmunomarcación en los distintos tiempos de muestreo aplicando pruebas paramétricas para varios grupos (ANOVA), y como análisis posterior se aplicó el post-test de Duncan.Los resultados mostraron expresión de TNF-α e IL-6 en el citoplasma de los hepatocitos todas las muestras analizadas. Se determinó un aumento significativo en la expresión de IL-6 los días 7 y 21 posparto en relación con el día -21 (preparto). Porcentaje de área inmunomarcada para TNF-α e IL-6 en las muestras de biopsias hepáticas en los diferentes tiempos.Letras diferentes indican diferencias significativas (p < 0,05).Estos resultados sugieren un posible estado pro-inflamatorio hepático posparto, que se vinculan con resultados obtenidos por nuestro grupo de trabajo y que se vinculan a la condición corporal de los animales y al estado de desbalance metabólico de esa etapa. Estas y otras determinaciones que se están realizando actualmente en nuestro laboratorio, contribuirán al mayor conocimiento del hígado de la vaca en transición.Bibliografía1- Angeli E., Trionfini V., Gareis N.C., Matiller V., Huber E., Rey F., Salvetti N.R., Ortega H.H., Hein G.J. 2019. Protein and gene expression of relevant enzymes and nuclear receptor of hepatic lipid metabolism in grazing dairy cattle during the transition period. Res. Vet. Sci., 123: 223–231. https://doi.org/10.1016/j.rvsc.2019.01.0202- Bobe G., Young J. and Beitz D. 2004. Invited review: Pathology, etiology, prevention, and treatment of fatty liver in dairy cows. J. Dairy Sci., 87: 3105–3124.3- Díaz P.U., Hein G.J., Belotti E.M., Rodriguez F.M., Rey F., Amweg N.A., Matiller V., Baravalle M.E.; Ortega H.H., Salvetti N.R. BMP2, 4, 6 and BMPR1B are altered from early stages of bovine cystic ovarian disease development. Reproduction, 152(4): 333-50.4- Trevisi E., Amadori M., Cogrossi S., Razzuoli E., Bertoni G. 2012. Metabolic stress and inflammatory response in high-yielding, periparturient dairy cows. Res. Vet. Sci., 93: 695–704.