Expresión folicular de segundos mensajeros de la hormona del crecimiento en vacas con Enfermedad Quística Ovárica.

LEIVA C.; DURANTE, L; BELOTTI, M.; DÍAZ P.U.; MATILLER V.; SALVETTI N.; ORTEGA H. H.; MARELLI, B.

Esperanza

Jornada; . VIII Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión de la Facultad de Ciencias Veterinarias; 2020

FCV-UNL

La hormona del crecimiento (GH) es producida principalmente por la adenohipófisis, estimula la liberación del factor de crecimiento análogo a insulina (IGF-I) en el hígado y es clave para el control y distribución de los nutrientes2. GH también es el regulador postnatal del crecimiento y del metabolismo en los mamíferos. Juega un rol crítico en el control de la lactancia, en el proceso de desarrollo y crecimiento de la glándula mamaria y en la fertilidad en el bovino. En diferentes especies se ha demostrado que la GH puede actuar selectivamente sobre los folículos ováricos, inhibiendo el crecimiento del folículo preovulatorio y estimulando el desarrollo de folículos subordinados. La función ovárica en el bovino está controlada por mecanismos de retroalimentación locales y sistémicos que aseguran que en más del 96% de los ciclos estrales sólo ovule un folículo. Diferentes estímulos sistémicos como las gonadotrofinas, la GH, el IGF-I y la insulina influyen en el crecimiento folicular 4, y factores producidos localmente, como IGF-I e inhibina, también tienen un rol modulador fundamental. La alteración o disrupción de la sincronía entre estos actores podría contribuir a la patogenia de enfermedades reproductivas, como la enfermedad quística ovárica (EQO) o la persistencia de folículos anovulatorios, las cuales comprometen la eficiencia de los rodeos lecheros. Los efectos somatotróficos y metabólicos de GH están mediados por el receptor de GHR localizado en la membrana celular. El mecanismo de señalización intracelular de dicho receptor depende, principalmente, de la activación de dos familias de proteínas intracelulares: las JAKs (Janus kinasas) y las STATs (signal transducers and activators transcription), por lo que se lo conoce como la vía JAK-STAT1. Las JAKs están asociadas al domino intracelular del receptor de modo que, luego de la unión de GH, estas proteínas son activadas por transactivación y luego fosforilan a las STATs. Las STATs fosforiladas translocan al núcleo donde se unen a elementos de respuesta específicos. Considerando lo anteriormente expuesto nos planteamos como objetivo del presente trabajo caracterizar posibles alteraciones en el mecanismo de señalización de la GH asociados a la EQO. Para ello nos propusimos evaluar la expresión proteica de STAT3, en las diferentes categorías foliculares de ovarios de bovinos sanos sincronizados y en ovarios de animales con EQO. En esta experiencia se utilizaron vacas de la raza Holando Argentino. Los ovarios controles fueron obtenidos de animales (n=5) cuyos ciclos estrales fueron sincronizados mediante el protocolo G6G - Ovsynch. Además, se obtuvieron ovarios de vacas con EQO espontánea (n=9). Las muestras fueron obtenidas mediante ovariectomía bilateral dos días después de finalizada la sincronización (proestro) para los controles y en el momento del diagnóstico para EQO. Los ovarios se fijaron en formol bufferado y procesaron mediante técnicas histológicas de rutina3. Los cortes histológicos fueron analizados utilizando la técnica de inmunohistoquímica indirecta con un anticuerpo comercial anti-STAT3 total (Abcam / ab32143) 1:300. Para el revelado se utilizó el sistema CytScanTM Biotinyloted Link (Cell Marque). Las imágenes microscópicas de folículos ováricos de distintas categorías fueron digitalizadas y analizadas utilizando el sistema Image-Pro Plus 3.0.1. determinando el porcentaje (%) de área inmunopositiva, tanto en células de la granulosa como de la teca. Los valores obtenidos se analizaron mediante el software SPSS 10.1 utilizando el test de ANOVA seguido del test de Duncan para comparaciones múltiples. Como resultado podemos mencionar que fue posible detectar la inmunoexpresión proteica de STAT3 total tanto en la teca como en la granulosa de todas las categorías foliculares analizadas: primordial, primarios, preantral pequeño, preantral grande, antral, atrésico y quiste. Además, en el grupo EQO se evidenció una disminución de su expresión en células de la granulosa en folículos antrales, quistes y atrésicos comparados con los estadios iniciales de la foliculogénesis (p