Estudio comparativo de variantes del virus herpes simplex tipo 1 y 2 obtenidas con carragenanos y aciclovir

MATEU CG, ARTUSO MC, PUJOL CA, CARLUCCI MJ

Congreso; X Congreso Argentino de Virologia; 2011

El virus Herpes simplex (HSV) es un ubicuo herpesvirus humano que infecta membranas mucosas. Se caracteriza por un rápido ciclo de vida y diseminación, destrucción de las células infectadas, y su habilidad por establecer latencia en neuronas sensoriales. HSV causa una variedad de enfermedades humanas incluyendo vesículas labiales, infecciones oculares y genitales, hasta encefalitis y neumonía. Actualmente no hay vacunas efectivas, existiendo solamente terapias paliativas antivirales. Estudios previos demostraron que pasajes sucesivos en células Vero de HSV tipo 1 ó 2, en presencia de concentraciones crecientes de carragenanos naturales (CGNs), seleccionan variantes virales avirulentas en ratones infectados por vías mucosas después del pasaje 14. Los CGNs son compuestos naturales con potente actividad antiherpética, que están siendo ensayados clínicamente en la actualidad. Las variantes obtenidas mostraron las siguientes características: forman sincicios,, presentan valores bajos de resistencia relativa (RR) a análogos de nucleósidos como el aciclovir (ACV) (CGN-22F: 1,7; CGN-22MS: 8,8) y al CGN (CGN-22F: 16; CGN22MS: 8) que les dio origen, poseen una replicación viral similar a la cepa patrón y tienen una respuesta de citoquinas proinflamatoria disminuida para las variantes del HSV-1 y aumentadas para HSV-2 respecto de sus controles respectivos. Los objetivos de este trabajo fueron comparar las variantes del HSV obtenidas con la misma estrategia que las anteriores pero empleando el ACV (antiviral de uso clínico) que utiliza mecanismos de acción distinto a los CGNs y analizar su comportamiento in vivo. Para ello se hicieron 6 pasajes sucesivos de HSV-1 (F) y HSV-2 (MS) en presencia de ACV. Se obtuvieron clones del último pasaje, los cuales fueron  utilizados para estudiar: 1) el efecto citopático de las variantes por tinción con Giemsa, 2) la susceptibilidad a distintos compuesto como heparina, CGNs Kappa e Iota, ACV y Foscarnet, 3) la cinética de replicación en células Vero y en una línea celular de macrófagos murinos (RAW264.7), 4) la virulencia y la respuesta inmune innata en ratones BALB/c infectados por vía intranasal e intravaginal. Las variantes ACV-6 (F) y ACV-6 (MS) seleccionadas no mostraron cambios en su efecto citopático, produciendo el redondeamiento celular típico de la cepa patrón. Por otra parte, mostraron ser susceptibles a los CGNs y a la heparina, pero con alta RR al ACV (ACV-6F RR: 52; ACV-6MS RR: 160). La replicación in vitro en células Vero fue similar a la  cepa control. En cuanto a la virulencia, ambas variantes resultaron 100% asintomáticas por ambas vías de inoculación, con un patrón de citoquinas diferenciado. Las variantes virales asintomáticas obtenidas nos permiten inferir la existencia en el virion de numerosos blancos responsables de la virulencia que pueden ser modificados en forma diferencial empleando compuestos de estructuras químicas y mecanismos de acción diferentes. La profundización de estos conocimientos nos posibilitarán definir promisorias aplicaciones profilácticas y terapéuticas.