Impacto del polimorfismo de la proteina A de Staphylococcus aureus en la induccion de la respuesta inflamtoria

GAROFALO AILIN; GIAI CONSTANZA; SORDELLI DANIEL; GOMEZ MARISA

Capital Federal

Congreso; XII congreso argentino de microbiologia; 2010

Asociacion Argentina de Microbiologia

Staphylococcuas aureus es un patógeno de gran importancia médica que cuenta con múltiples mecanismos de patogenicidad. Las infecciones estafilocóccicas se caracterizan por una intensa respuesta inflamatoria mediada por el reclutamiento de neutrófilos al sitio de la infeccíon. La proteína A (SpA), presente en la superficie de todos los aislamientos de S. aureus, posee una región polimórfica denominada Xr que consiste de un número variable, entre 1 y 26, de secuencias cortas repetitivas (SSR) de 24 pares de bases. Nuestro grupo de investigación ha demostrado el rol crítico de SpA en la inducción de respuesta inflamatoria. La región Xr induce la secreción de INF-beta e IL-6 en células epiteliales de las vias aéreas lo cual conduce al reclutamiento de neutrófilos al pulmón. El objetivo de este trabajo fue deterrminar el impacto del número de SSR presentes en la región polimórfica Xr de SpA en la inducción de respuesta inflamatoria. Se utilizaron proteínas Xr recombinantes conteniendo diferente número de SSR (Xr1, Xr8, Xr12) para estimular células epiteliales en cultivo primario y macrófagos , y se determinó la activación de la cascada de señalización de INF-beta. Para los estudios in vivo, grupos de ratones fueron inoculados con las diferentes proteínas recombinantes ( Xr1, Xr8, Xr12, 0,125 nmoles/g) por ruta intraperitoneal y se determinó la presencia de neutrúfilos en el peritoneo por citometría de flujo. A fin de evaluar la respuesta inflamatoria en pulmón, grupos de ratones fueron inoculados con Xr1, Xr8 o Xr12 (0,25 nmoles/g) y se determinó la producción de INF- beta e IL-6 por PCR de Tiempo Real, la activación de los factores de transcripción STAT1 y STAT3 por western blot y el reclutamiento de neutrófilos en homogenatos de pulmón. Se determinó que existe una correlación entre el número de SSR de la región Xr y la inducción de la cascada de señalización de INF-beta en macrófagos y células epiteliales. Se observó mayor grado de activación de STAT 1 en células estimuladas con Xr8 con respecto a células estimuladas con Xr1. La activación de STAT 3 no fue dependiente del número de SSR.  Se demostró que la presencia de mayor número de SSR en la región Xr estimula mayor inducción de genes regulados por INF-beta tales como IP-10 e IL-6. Mediante los experimentos in vivo se determinó que la presencia de 8 SSR en la región polimórfica Xr es suficiente para la activación de STAT 1 y STAT 3 lo cual se correlacionó con un mayor porcentaje de neutrófilos al pulmón (p< 0,05 test Mann Whitney comparado con Xr1). No se observaron diferencias significativas entre Xr8 y Xr12 en el modelo de neumonía. En el modelo de inoculación sistémica se observó que la región polimórfica Xr induce el reclutamiento de neutrófilos al peritoneo y, en forma similar a los resultados obtenidos en macrófagos in vivo, se requiere de más de  8 SSR para  la inducción de respuesta inflamatoria en este modelo. Los resultados obtenidos permiten demostrar que la presencia de un mayor número de SSR en la región polimórfica Xr de la proteína A de S. aureus se correlacionaría con una mayor capacidad de inducción respuesta inflamatoria mediada por INF- beta.