IDENTIFICACIÓN MOLECULAR FILOGENÉTICA DE HONGOS ENTOMOPATÓGENOS BIOCONTROLADORES DE CULTIVOS AGRÍCOLAS Y FORESTALES DEL GENERO BEAUVERIA

BICH G. A.; CASTRILLO M. L.; ZARATE R. M.; VILLALBA L. L.; ZAPATA P. D.

CORRIENTES

Taller; I Reunión sobre el Manejo de Plagas y Agentes de Control Biológico del Nordeste Argentino y II Taller de Manejo de Malezas y Plantas Invasoras: El control biológico como alternativa; 2018

La producción primaria representa una de las principales actividades económicas de la provincia de Misiones. Los cultivos agrícolas y forestales se ven afectados por numerosas plagas y enfermedades. Una alternativa promisoria y novedosa para el control de plagas de la agricultura es el empleo de hongos entomopatógenos. Sin embargo el conocimiento sobre los hongos entomopatógenos presentes en los suelos de Misiones con capacidad de ser empleados en biocontrol es aún incipiente. Por tal motivo, se propuso aislar e identificar molecularmente cepas de hongos entomopatógenos del género Beauveria a partir de cultivos de interés agrícola y forestal para el desarrollo y mejora de tecnologías de biocontrol de insectos en Argentina. En octubre de 2017 se tomaron muestras de suelos de diferentes plantaciones forestales y agrícolas de la provincia de Misiones con finalidad de aislar diferentes cepas de hongos biocontroladores nativos del género Beauveria. Se utilizaron técnicas estandarizadas de aislamiento de microorganismos por dilucionesseriadas en diferentes medios de cultivo semiselectivos conservando solo los hongos con características propias del género propuesto. La identificación se realizó primeramente en base a las características macro y micromorfológicas de los cultivos fúngicos. Luego se realizó la extracción de ADN y la secuenciación de las regiones ITS del ADN ribosomal para su identificación molecular y construcción de árboles filogenéticos utilizando secuencias disponibles en la base de datos del GenBank. Para el análisis se consideraron aquellas secuencias publicadas o no redundantes. Cómo outgroup se empleó la secuencia de ITS de Isaria javanica (N° de acceso Genbank DQ403723). Se realizó el alineamiento de las secuencias y construcción de los árboles filogenéticos empleando losprogramas Geneious 8 y Mega versión 6. Los árboles construidos se analizaron por los métodos de Máxima Parsimonia (MP), Máxima verosimilitud (ML) y el método de unión de vecinos o NeighbourJoining (NJ). En la evaluación de los mismos se empleó un test de Bootstrap basado en 1000 replicaciones, para todos los casos. Se aislaron e identificaron morfológicamente tres cepas de Beauveria bassiana sensu lato que fueron codificadas como HEP1, HEP3 y HEP13. Las secuenciasgenéticas obtenidas para las tres cepas fúngicas presentaron índices de similaridad o identidad mayores al 99%, mediante el uso del motor de búsqueda de identidad y similitud de las bases de datos del NCBI (BLASTn) y del FungalBarcoding con secuencias reportadas de la especie B. bassiana. Mediante la conformación de los árboles de relaciones filogenéticas se pudo observar que las cepas fúngicas HEP1, HEP3 y HEP13 formaron un agrupamiento junto a cepas fúngicas de B. bassiana con valores de Bootstrap mayores a 98%, para los tres métodos evaluados. Este estudio colaboró en el conocimiento de la microflora de los cultivos argentinos como base para estudios que permitan el desarrollo de productos biotecnológicos en el área de biocontrol. Próximos pasos en lacaracterización molecular de las cepas fúngicas serán la amplificación de otras regiones genéticas con el fin de profundizar la información brindada por los marcadores ITS.