CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

INTRODUCCION: Actualmente, las investigaciones en control de plagas buscan el desarrollo de plaguicidas empleando organismos con capacidad natural de parasitar y matar a las plagas de las plantas. Estos organismos son llamados comúnmente biocontroladores de plagas. Dentro de los agentes biocontroladores se incluyen distintas cepas fúngicas del género Beauveria. En el desarrollo de productos biológicos controladores de alta calidad en base a hongos, se hace necesario el mantenimiento y conservación de los cultivos fúngicos, lo cual tiene primordial importancia para garantizar las características originales de las cepas de producción (Cárdenas, 2010). Uno de los principales objetivos a alcanzar para conservar correctamente las cepas microbianas en los laboratorios de microbiología es que durante el tiempo de conservación sobrevivan al menos el 70-80% de las células (López y Fernández, 2000). La conservación de hongos en diferentes medios de cultivo requiere de mucho cuidado, ya que pueden ser rápidamente consumidos y necesitan ser pasados a medios de cultivos frescos frecuentemente, demandando tiempo y posibilitando la contaminación (Diogo et al., 2005).Dada la enorme diversidad microbiana, no existe una técnica general y óptima de conservación para todos los microorganismos, y por ello cada microorganismo soportará determinados métodos de conservación mejor que otros. Este último punto hace necesario evaluar diferentes métodos de conservación para cada cepa microbiana de interés biotecnológico. Por ello, como objetivo del presente trabajo se propuso evaluar diferentes técnicas de conservación calculando la viabilidad de tres cepas fúngicas de Beauveria bassiana luego de su almacenamiento.METODOLOGÍA: Se seleccionaron 3 cepas fúngicas de la especie B. bassiana, HEP1, HEP3 y HEP13, pertenecientes al cepario de hongos de interés biotecnológico del Instituto de Biotecnología Misiones ?Dra. María E. Reca?. Se evaluaron tres condiciones de cultivo, para cada una de las cepas fúngicas: medio de cultivo papa-dextrosa-agar (PDA), granos de arroz estéril y agua destilada estéril (Humber, 1997; Alves et al., 1998; Cárdenas, 2010). Las cepas fueron inoculadas en cada uno de los tubos de los tratamientos y se incubaron a 28°C durante 7 a 10 días. Este procedimiento se realizó por triplicado. Para el caso de los tubos con PDA se inoculó un disco de la colonia fúngica en un tubo con medio de cultivo PDA. Para el caso de los tubos con arroz esterilizado se inoculó una suspensión de conidias de 107 conidias/mL de cada una de las cepas fúngicas. En el caso de tubos con agua destilada estéril, se inocularon los tubos con un disco de la colonia fúngica. Estos tubos fueron conservados a 4°C por un periodo de 12 y 24 meses, donde se realizó la evaluación de conservación en cada una de los tratamientos a través del parámetro de viabilidad de las conidias producidas (Angel, 2006). Para la evaluación de la viabilidad, en microscopio óptico se contabilizó el número de conidias germinadas / número de conidias contabilizadas totales. El análisis de varianza (ANOVA) se realizó mediante los programas Statgraphics Centurion XV y GraphPad Prims 6 para Windows.RESULTADOS: En la evaluación de la viabilidad de las conidias de las cepas de B. bassiana almacenadas en PDA, se observaron valores altos de viabilidad de las conidias, siempre mayores a 90%, tanto en los periodos de 12 y 24 meses de almacenamiento. Un comportamiento similar se observó cuando las cepas fúngicas fueron conservadas en tubos con agua destilada estéril. Sin embargo, cuando estas cepas fúngicas fueron conservadas en granos de arroz estéril se observó una disminución estadísticamente significativa en el porcentaje de viabilidad tanto a los 12 como a los 24 meses de almacenamiento. En líneas generales la conservación de las cepas fúngicas de Beauveria en tubos con PDA o agua destilada estéril no presentó diferencias estadísticamente significativas para periodos de tiempo de almacenamiento similares. Sin embargo, se evidenciaron diferencias estadísticamente significativas cuando estas cepas fúngicas fueron almacenadas en granos de arroz estéril. En ninguno de los métodos de conservación empleados se observó la contaminación de los tubos con ácaros o con otros hongos por lo cual las técnicas evaluadas fueron adecuadas en relación a su pureza.DISCUSION: La conservación de hongos filamentosos en agua destilada está reportada para diversos géneros de hongos como un método que puede presentar buenos porcentajes de viabilidad y pureza de las cepas, lo que se une a su bajo costo y sencillez. Sin embargo, también está documentado que la viabilidad de conidias del hongo entomopatógeno biocontrolador Peaecilomyces fumosoroseus disminuyó luego de su conservación por 18 meses en agua destilada, indicando que esta técnica también puede tener efectos deletéreos en algunas cepas fúngicas (López-Lastra et al., 2002). En el presente trabajo la conservación de cepas de hongos entomopatógenos de la especie B. bassiana utilizando agua destilada estéril y PDA resultaron ser los métodos más eficientes. En el periodo de evaluación de dos años, las cepas fúngicas evaluadas por estos métodos conservaron porcentajes de viabilidad entre 90% y 100%. Resultados similares han sido reportados por diversos autores para hongos hasta por periodos de 5 años (López-Lastra et al., 2002; Diogo et al., 2005; Ángel, 2006). En cuanto a la técnica de conservación de hongos biocontroladores en granos de arroz estéril, es una técnica recomendada para géneros fúngicos biocontroladores como Trichoderma, con periodos de almacenamiento a temperatura ambiente de hasta seis meses sin pérdida de viabilidad o actividad antagónica (Cárdenas, 2010). Sin embargo, a partir de los resultados del presente trabajo no se recomienda en hongos entomopatógenos ya que se observó una pérdida significativa de la viabilidad de las conidias de Beauveria. Por ello, teniendo en cuenta lo observado para las cepas de Beauveria evaluadas en el presente trabajo, siempre es aconsejable evaluar cuál es el mejor método para cada cepa y además considerar la disponibilidad de equipamiento con que cuente el laboratorio.CONCLUSION: Los métodos de conservación más eficientes para las cepas de hongos entomopatógenos evaluadas de la especie B. bassiana resultaron ser aquellos que utilizan agua destilada estéril y PDA. Aun no hay publicado su Libro de Resúmenes pero dijeron que en breve lo publicarían.

enviar mensaje