Obtención de la secuencia estructural y reguladora del gen que codifica para la enzima celobiohidrolasa 1 en un aislamiento de Trichoderma nativo de Misiones.

CASTRILLO, ML; BICH G. A.; AMERIO, NS; SILVA, MRV; ZAPATA PD; VILLALBA LL

Corrientes

Jornada; Jornadas Regionales de Genética; 2016

La bioconversión de celulosa a etanol a través de las enzimas celulasas ha surgido como una alternativa potencial para reducir el uso de combustibles fósiles, pero el alto costo de producción ha obstaculizado su aplicación industrial. Para subsanar este obstáculo, un posible camino es profundizar sobre las características moleculares de los sistemas enzimáticos de microorganismos celulolíticos. El género Trichoderma secreta un complejo enzimático celulasas que actúan sinérgicamente para hidrolizar la celulosa, dentro de ellas, las celobiohidrolasas (CBH) son las más abundantes del complejo. Nuestro objetivo fue obtener la secuencia génica de la enzima celobiohidrolasa 1 mediante cebadores degenerados y secuenciación del genoma de un aislamiento de Trichoderma nativo de Misiones. Fueron diseñados cebadores degenerados sobre regiones conservadas de las secuencias proteicas ya conocidas de CBH1. Se amplificaron, purificaron y secuenciaron los fragmentos génicos obtenidos y se logró obtener una secuencia génica de 372 pb que arrojó una identidad máxima del 95% con el gen celobiohidrolasa (cbh1) de T. harzianum. A partir de allí, se continuó con la estrategia de secuenciación del genoma completo del aislamiento de Trichoderma con el fin de obtener la secuencia completa del gen cbh1. Las lecturas obtenidas de la secuenciación del genoma fueron sometidas a búsquedas por homología utilizando el programa Geneious 8.1.7. Las secuencias de enzimas celulasas ya anotadas de especies de Trichoderma y afines, fueron utilizadas como referencia durante el proceso de anotación. Como resultado de este procedimiento se logró obtener la secuencia reguladora y estructural del gen cbh1. El diseño de cebadores degenerados permitió obtener un fragmento génico de 372 pb con una identidad máxima del 95% con el gen cbh1 de T. harzianum, que sirvió de punto de partida para la obtención de la secuencia génica reguladora y estructural del gen cbh1 en el aislamiento de Trichoderma.