IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE HONGOS FITOPATÓGENOS CAUSANTES DE DAMPING-OFF EN LA PROVINCIA DE MISIONES

ZARATE, RODRIGO MATEO; BICH, GUSTAVO ANGEL; CASTRILLO, MARIA LORENA; VILLALBA, LAURA LIDIA; ZAPATA, PEDRO DARIO

POSADAS

Jornada; IX JORNADAS CIENTIFICO TECNOLOGICAS DE LA FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, QUIMICAS Y NATURALES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE MISIONES; 2015

La identificación de los agentes causantes de enfermedades fúngicas, como Damping-off, que afectan a los cultivos hortícolas, generalmente se realiza por medio de la caracterización morfológica en placas de Petri, y por medio de la observación de sus estructuras reproductivas en el microscopio. En general con esta metodología se logra determinar hasta el nivel de género, sin embargo determinar hasta el nivel de especie suele ser muy complicado en algunos géneros y muchas veces se logran ambigüedades. En este contexto los datos moleculares surgen como una importante herramienta para complementar a la información morfológica y de esta manera lograr una correcta identificación de los agentes causante de diferentes enfermedades en cultivos hortícolas de la región. El objetivo del presente trabajo fue identificar morfológica y molecularmente tres aislados fúngicos fitopatógenos de cultivos con síntomas de Damping-off, en huertas de la provincia de Misiones, Argentina. Los aislamientos fúngicos obtenidos del material enfermo se repicaron en placas con el medio de cultivo agar-papa dextrosa (PDA) y se incubaron a 28°C.Luegoseprocedióasuidentificaciónmorfológicamediantela observación directa de las placas y el empleo de microscopía óptica. Una vez identificado el hongo hasta el nivel de género, se procedió al aislamiento de ácidos nucleicos para su corroboración molecular. A partir del material genético extraído, se logró amplificar y secuenciar la región ITS1-5,8S-ITS2. Una vez obtenida la región de interés se contrastó la información obtenida con la existente en las bases de datos, mediante la herramienta Blast (Basic Local Alignment Search Tool) del NCBI (National Center For Biotechnology Information) y la herramienta pairwise sequence alignment del Fungal barcoding disponibles on-line. Se seleccionaron aquellas secuencias con mayor porcentaje de similitud y se analizaron filogenéticamente tanto por el programa Geneius 3.6.1 como por Mega 5.1. En la observación microscópica se determinaron dos de los aislamientos fúngicos como pertenecientes al género Fusarium y un tercer aislamiento fúngico como posiblemente perteneciente al género Phytophthora. Luego del aislamiento de ácidos nucleicos, la amplificación y la secuenciación de la región ITS1-5,8S-ITS2 y la contrastación de la secuencias con las bases de datos biológicos, se corroboró por métodos moleculares que los dos aislamientos de Fusarium correspondían a F. oxysporum. Por otro lado, el género fúngico originalmente identificado como Phytophthora en realidad correspondía a la especie fúngica Conidiobolus coronatus, género fúngico con características morfológicas en general muy similares a Phytophthora, pero es un género fúngico que no es reconocido como causante de Damping-off, sin embargo pudo estar en el suelo asociado a las muestras vegetales.