DISEÑO DE CEBADORES DEGENERADOS PARA LA AMPLIFICACIÓN DEL GEN QUE CODIFICA PARA B-1,4-GLUCOSIDA

CASTRILLO, MARIA LORENA; GONZALEZ, ESTEBAN; BARENGO, MARCELA; BICH, GUSTAVO ANGEL; DIAZ, VERONICA GABRIELA; ZAPATA, PEDRO DARIO; VILLALBA, LAURA LIDIA

Salta

Congreso; XLII Congreso Argentino de Genetica; 2013

En el proceso de producción de bioetanol, se requieren enzimas del complejo celulasas, como las β-1,4-glucosidasas. La bioconversión de celulosa a etanol surgió como una alternativa para reducir el uso de combustibles fósiles, pero su alto costo ha obstaculizado su aplicación industrial. Una forma de favorecer su empleo es identificar y caracterizar los sistemas génicos secretores de β-1,4-glucosidasas. El objetivo del presente trabajo fue diseñar cebadores degenerados que permitan la amplificación de un fragmento génico que codifica para la enzima β-1,4-glucosidasa en hongos del genero Trichoderma nativos de Misiones. Mediante el recurso bioinformático BLASTp (Basic Local Aligment Search Tool for protein) del NCBI (National Center of Biotechnology Information) se realizó un análisis de similitud utilizando como referencia la secuencia aminoacídica de beta-1,4-glucosidasa de T. reesei (BA74959.1) y se eligieron 21 secuencias por mayor porcentaje de identidad. Se realizó un alineamiento múltiple mediante el programa ClustalW2 y fueron seleccionadas dos regiones conservadas (A y B) para el diseño manual del cebador sentido y una región para el cebador antisentido, basándose en el código genético. Los mismos fueron analizados ?in silico? mediante el programa Fast PCR 6.2, pudiéndose concluir que la combinación cebador sentido B y cebador antisentido proporcionan el contenido CG y la Tm recomendadas para su óptima amplificación. De este modo, mediante la puesta a punto de la PCR sería posible obtener un fragmento génico de aproximadamente de 350pb.