Efecto de la intoxicación crónica con Cadmio sobre el grado de fragmentación de ADN genómico de hígado de rata

LARREGLE, ETHEL; FERNANDEZ, P; GIMENEZ, M. S.

San Luis

Congreso; XV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Cuyo; 1997

Sociedad de Biologia de Cuyo

Introducción. El Cadmio (Cd) es un contaminante ambiental, de conocida hepatotoxicidad. En un estudio previo en este laboratorio observamos que la exposición a bajas dosis de cadmio en forma crónica produce alteraciones histológicas en los hígados de ratas intoxicadas, principalmente a nivel de los núcleos de los hepatocitos. El objetivo de este trabajo fue determinar si el Cd produce alteraciones a nivel del ADN genómico de hígados de ratas tratadas, para lo cual medimos el grado de fragmentación del mismo. Métodos. Se sometieron ratas machos Wistar adultas (180-220 g de peso) a intoxicación con CdCl2 en el agua de bebida (15 ppm de Cd) durante 7 semanas. Los controles bebieron agua sin Cd. Al cabo del tratamiento se sacrificaron e inmediatamente se extrajeron los hígados que fueron colocados en hielo seco hasta su procesamiento. El ADN genómico se extrajo utilizando el método descripto en Molecular Cloning, Sambrook, Fritsch, Maniatis, 2 Ed. CSH Press (1989), a partir de 100mg de hígado. Posteriormente se procedió a la cuantificación del ADN obtenido por la absorbancia en UV (260nm). La fragmentación se determinó en muestras controles y CD por el método basado en la formación de un complejo fluorescente entre el ADN de doble cadena y el bromuro de etidio, usando como fluorescencia cero una solución de referencia sin ADN. Se procedió a la extracción de ARN total a partir de otra fracción de tejido de 100 mg, por el método de Chomczynscki y Sacchi (Anal. Biochem. 162, 156, 1987). Resultados. Las muestras Cd mostraron una intensidad de fluorescencia 18% menor que las muestras controles. En la cuantificación por UV se obtuvo un valor significativamente mayor en las Cd que en las controles (ug/mg tej.: 5.83±0.87 vs 2.52±0.52, P