INVESTIGADORES
RODRIGUEZ Ana Maria
congresos y reuniones científicas
Título:
Construcción de Virus Vaccinia recombinantes que expresan la proteína Nef de las variantes B o BF del HIV para su aplicación en un modelo murino de desafío
Autor/es:
G. SCHULMAN; ANA MARÍA RODRIGUEZ; D. MÓNACO; F. PASCUTTI; G. TURK; H. SALOMÓN; M.M. GHERARDI
Lugar:
Paraná
Reunión:
Congreso; Congreso Nacional de SIDA; 2007
Resumen:
La utilización del modelo de desafío murino basado en virus Vaccinia (VV) expresando genes del HIV, como un sustituto de la infección con HIV-1, es un sistema ampliamente empleado en investigación sobre desarrollo de vacunas. El objetivo de este trabajo fue la generación y caracterización de VV recombinantes (VVr) expresando el antígeno Nef del subtipo B o intersubtipo BF del HIV-1, en la cepa de VV Western Reserve infectiva en ratones. Los VVr se obtuvieron por recombinación homóloga entre el locus de hemaglutinina (HA) del genoma viral y secuencias homólogas en un vector de transferencia cuyo cassette de recombinación posee el gen de interés y el gen reportero de ß-Glucuronidasa (ß-gus). La purificación de los clones positivos se realizó tras 7 rondas de infección y selección de las placas ß-Gus+, controlando periódicamente la expresión de Nef por Western Blot. Tras obtener un número equivalente de UFP totales y ß-Gus+, se verificó la pureza de los VVr por amplificación por PCR del locus HA, que luego fue secuenciado para corroborar la identidad del inserto. Finalmente, se realizaron curvas de crecimiento de los VVr in vitro e in vivo, en el modelo Balb/c. CONCLUSIÓN: En este trabajo se muestra la generación de VVr que se utilizarán en modelos de desafío para evaluar protección en animales previamente inmunizados con Nef B y BF del HIV-1.