DETERMINACIÓN DE METALOTIONEÍNAS MEDIANTE EL ENSAYO DE SATURACIÓN CON MERCURIO: LOS RESULTADOS QUE NO RESULTARON

BUZZI, NATALIA S; TRUCHET D M; FABIÁN E. GARCIA; JORGE E. MARCOVECCHIO

San Luis

Congreso; VII Congreso Argentino de la Sociedad de Toxicología y Química Ambiental; 2018

Sociedad de Toxicología y Química Ambiental de Argentina

Las metalotioneínas (MT), una familia de proteínas no enzimáticas de peso molecular relativamente bajo, se caracterizan por la presencia de residuos de cisteína, ausencia de aminoácidos aromáticos y además estabilidad al calor. Dado que están involucradas en múltiples roles biológicos: homeostasis de metales esenciales, detoxificación de metales no esenciales, protección celular contra el estrés oxidativo entre otros, la cuantificación de MT resulta una tarea fundamental en varios campos de la ciencia, entre ellos la ecotoxicología. Las MT están presentes en todos los tejidos, pero en los organismos acuáticos los órganos más frecuentemente estudiados son las branquias y el hígado por su papel en la absorción de metales y en la bioacumulación/desintoxicación, respectivamente. Existen una gran cantidad de métodos de determinación de MT, por lo que resulta complicado comparar los resultados obtenidos con datos de la bibliografía en esta temática. Entre los métodos indirectos, podemos mencionar los ensayos de saturación con iones metálicos, cuyo principio depende de la diferente afinidad de las MT por los iones de metales pesados. En este sentido, el ensayo de saturación con Hg (MSA) se basa en la saturación de las MT con iones Hg para luego eliminar el exceso del metal con una proteína como la albúmina sérica bovina. Posteriormente, esta solución se calienta y la unión Hg-MT se separa por centrifugación y se determina el contenido del metal por AAS, el cual se corresponde con la concentración de MT. En este trabajo se planteó evaluar a través del MSA, la concentración de MT, como biomarcador de metales pesados, en hepatopáncreas de cangrejos machos de la especie Neohelice granulata del Estuario de Bahía Blanca. En el laboratorio se extrajo el hepatopáncreas, se homogeneizó en buffer Tris-HCl y se procedió al fraccionamiento subcelular. Posteriormente se realizó el MSA. Tras varios ensayos y modificaciones de la mencionada técnica no se logró repetitividad en los resultados: más aún, estos no concordaron con las diluciones realizadas tanto en la preparación de la muestra, durante el MSA y finalmente en la cuantificación de Hg por CV-FAAS ¿Podrá ser un error en el desarrollo de la técnica, de los cálculos o definitivamente no es aplicable para lograr el objetivo deseado? Como conclusión, si bien el resultado no fue el esperado, es fundamental explorar distintas metodologías hasta lograr los objetivos: una cuestión esencial para el análisis de biomarcadores.