Caracterización molecular de un nuevo integrón inusual de clase 1 asociado al gen de resistencia a quinolonas, qnrB6, de Citrobacter freundii

QUIROGA M.P.; JORDÁ VARGAS L.; QUIROGA C.; CENTRÓN D.

Lleida

Jornada; VI reunión del grupo de microbiología molecular de la Sociedad Española de Microbiología; 2006

grupo de microbiología molecular de la Sociedad Española de Microbiología

Los integrones se caracterizan por ser elementos genéticos capaces de integrar y expresar genes de resistencia a antibióticos. Los integrones de clase 1 están formados por una región 5’ conservada (cs), una región variable (vr-1) y una región 3’ cs. Los integrones inusuales son una versión extendida de los integrones de clase 1. Estos poseen la misma estructura más el gen de la recombinasa orf513, una segunda región variable (vr-2) y una región 3’ cs repetida. Los genes de resistencia ubicados en la vr-1 se encuentran en forma de cassettes, lo cual les confiere la capacidad de generar nuevos rearreglos de integrones. Por el contrario, la vr-2 está formada por genes con diferentes funcionalidades y que pueden provenir del cromosoma bacteriano. Varios integrones inusuales han sido descriptos conteniendo en vr-2 genes de resistencia a beta-lactámicos, trimetoprima, cloranfenicol y quinolonas. La resistencia a quinolonas surgió a partir de los años ‘80 dificultando el tratamiento de infecciones. El origen de esta resistencia puede ser tanto cromosómico, principalmente por mutaciones en gyrA, como plasmídico, mediada por el gen qnr. En los últimos años se describieron variantes alélicas de este gen en aislamientos clínicos y ambientales.En este trabajo, describimos un nuevo integrón inusual de clase 1 en un aislamiento clínico de Citrobacter freundii. Las pruebas de sensibilidad antibiótica, por el método de difusión y criterios CLSI 2005, mostraron el siguiente perfil de resistencia: resistente a amicacina, gentamicina, ciprofloxacina, aztreonam, trimetoprima/sulfametoxazol, piperacilina/tazobactam, ceftacidima, cefepima y amoxicilina/clavulánico, y sensible a imipenem y meropenem. Mediante cartografía por PCR, se determinó que este integrón contiene en la vr-1 los genes aac(6`)-Ib y aadA1, responsables de la resistencia a amicacina, tobramicina y netilmicia, y espectinomicina y estreptomicina, respectivamente. Además, se detectó el gen orf513, indicador de la presencia de los integrones inusuales. La caracterización de la vr-2 llevó a la determinación de la presencia del gen qnr, responsable de la resistencia a quinolonas. Por otro lado, la región comprendida entre orf513 y qnr contiene parte del operón sap, descripto en el cromosoma de E. coli; mientras que la región entre qnr y la repetición de 3´cs contiene únicamente el gen pspF. El ensamblado de estas secuencias evidencia una alta variabilidad en la vr-2, ya que los alelos de qnr fueron descriptos en diferentes contextos. Por último, el análisis comparativo de la secuencia qnr nos permitió determinar que este gen corresponde a un nuevo alelo, el cual denominamos qnrB6 y que presenta una identidad del 98% con el qnrB5 descripto en Salmonella enterica.Una vez más, se observa la asociación de la recombinasa ORF513 con diferentes rearreglos en vr-2 insertando regiones cromosómicas portadoras de determinantes de resistencia en un contexto de integrones.