IntI1 provista en trans posee la capacidad de escindir todos los cassettes, incluyendo a los cassettes inusuales attCcatB2ΔattI2 y ORFX-ybfA-ybfB-ybgA, encontrados en el integrón de clase 2 In2-8

RAMÍREZ MARÍA SOLEDAD; QUIROGA MARÍA PAULA; CENTRÓN DANIELA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología, VI Congreso Argentino de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica, SADEBAC, I Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

El transposón Tn7::In2-8, contiene un integrón de clase 2 el cual posee  un arreglo inusual siendo su estructura: sat2-aadB-catB2DattI2-dfrA1-sat2-aadA1-orfX-ybfA-ybfB-ybgA. Dicho integrón tiene la particularidad que río abajo del codón de terminación del gen catB2, el sitio attC esperado ha sido reemplazado por una secuencia de 244 pb 100% idéntica a una porción del sitio de recombinación de los integrones de clase 2 denominado attI2, convirtiéndolo así en un cassette inusual al cual indicaremos como attC-catB2-DattI2. Asimismo, localizada río abajo del gene ORFX se encuentra una secuencia parcial del attI (13 bp). Con el propósito de explorar desde un punto de vista funcional cuales cassettes y/o cassettes inusuales podian ser movilizados por la integrasa de tipo 1, se llevaron a cabo ensayos de recombinación in vivo según lo descripto por Gravel et al, de todas las posibles estructuras movilizables encontradas en el In2-8 utilizando los diferentes plásmidos recombinantes construidos para dicho fin. Todos los cassettes y cassettes inusuales localizados en el In2-8 pueden ser movilizados por la IntI1 provista en trans arrojando valores variables de frecuencia de escisión. La región que contiene attC-catB2DattI2-dfrA1-attC es reconocida por la IntI1 como un cassette fusionado, pero también IntI1 posee la capacidad de escindir al cassette inusual attC-catB2-DattI2 con alta eficiencia. Para confirmar la escisión del cassette inusual, se diseñaron cebadores específicos para poner en evidencia la presencia del cassette circularizado, obteniendo amplificación positiva para dos productos, lo cual esta indicando que la IntI1 reconoce dos sitios para mediar la escisión. El análisis de secuencia mostró que los sitios de reconocimiento de la IntI1 para mediar dicha movilización se corresponden uno de ellos a la G del propuesto sitio core GTTAACC del attI2, mientras que el otro sitio es la G de la secuencia  GTTATGA localizada a 62 pb del TAA del gen catB2. Resultados experimentales también revelaron que la estructura ORFX-ybfA-ybfB-ybgA es un elemento movilizable. La escisión del ORFX y del ybfB fueron identificadas. A su vez  la estructura ORFX-ybfA-ybfB-ybgA puede ser movilizada por la IntI1 reconociendo dos sitios diferentes. Tanto la escisión del attC-catB2-DattI2, como de los elementos contenidos en el modulo ORFX-ybfA-ybfB-ybgA, muestran la plasticidad del sistema de recombinación mediado por la integrasa de tipo 1.