Expresión en plantas de un antígeno quimérico de la bacteria STEC, agente causal del Síndrome Urémico Hemolítico

RAMOS DUARTE, ANDRÉS V; CORIGLIANO, MARIANA G.; SÁNCHEZ LÓPEZ, EDWIN F; MENDOZA MORALES, LUISA F; SANDER, VALERIA A.; CLEMENTE, MARINA

virtual

Jornada; II JORNADA DE JÓVENES BIONANOCIENTÍFICXS (JoBioN); 2020

JoBioN

Expresión en plantas de un antígeno quimérico de la bacteria STEC,agente causal del Síndrome Urémico HemolíticoVíctor A.Ramos-Duarte, Mariana Corigliano, Edwin F. Sánchez-López, Luisa F.Mendoza-Morales, Valeria A. Sander, Marina ClementeUnidad de Biotecnología6-UB6, IIB-INTECH, CONICET-UNSAM, Intendente Marino Km 8.2, B7130IWA Chascomús,Buenos Aires Provincia, Argentina. E-mail de contacto: varamosd@intech.gov.arEn Argentina, el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH) es causadoprincipalmente por el serotipo 0:157 H:7 de la Toxina Shiga Escherichia coli? (STEC) y representa la principal causa de insuficiencia renal aguda e hipertensiónarterial en lactantes y niños y la segunda causa de insuficiencia renal crónicay de trasplante renal. El empleo de adyuvantes en el diseño de vacunas asubunidades permite potenciar la respuesta inmune inducida por el antígeno. En nuestrolaboratorio hemos estudiado la función de las proteínas HSP90 de plantas(proteínas de choque térmico de 90- kDa) como carriers y adyuvantes (Coriglianoet al., 2013, Sánchez-López et al., 2019). Nuestro trabajo propone expresar transitoriamenteen plantas de tabaco y establemente en plantas de lechuga (transgénica) el antígenoquimérico derivado de las proteínas EspA, Intimina y Tir (EIT;EspA36-192-Intimin653-935-Tir258-361) de la bacteria E. coli STECfusionado a diferentes isoformas de la familia de las Hsp90 de plantas con elobjeto de evaluar a las Hsp90 como carriers/adyuvantes en este modelo de infección.Dado que los epítopes EIT fueron efectivos en la protección contra la infeccióncon STEC (Iannino et al., 2015), en el presente trabajo hemos diseñado estrategiaspara fusionar la proteína quimérica EIT a dos isoformas de las Hsp90 deplantas: Hsp81.2 de Arabidospis thaliana (AtHsp81.2) y Hsp90.3 de Nicotianabenthamiana (NbHsp90.3). Además, se obutvo una construcción con la proteínaquimérica EIT sola. Mediante la tecnología Gateway se obtuvieron las tresconstrucciones: p35S:GATFH-AtHsp81.2-EIT, p35S:GATFH-NbHsp90.3 yp35S:GATFH-EIT, las cuales se usaron para transformar la cepa GV3101 de Agrobacteriumtumefaciens: Para verificar la correcta inserción de los fragmentos cada construcciónfue secuenciada, digerida con enzimas de restricción y amplificada por PCR. Conlas bacterias A. tumefaciens recombinante se procederá a realizar deexpresión transitoria por agroinfiltración con las construcciones obtenidas enplantas de tabaco y la optimización de los parámetros de cultivo.REFERENCIASCorigliano, M. G., Fenoy,I., Sander, V., Maglioco, A., Goldman, A., & Clemente, M. (2013). Plant Heat Shock Protein 90 as carrier-adjuvant for inmunizationagainst a reporter antigen. Vaccine, 31(49), 5872-5878.Iannino, F., Hermann, C. K., Roset, M. S.,& Briones, C. G. (2015). Development of a dual vaccine for prevention of Brucellaabortus infecton and Escherichia coli O157:H7 intestinal colonization. Vaccine, 2248-2253.Sánchez-López, E. F.,Corigliano, M. G., Albarracín, R. M., Sander, V. A., Legarralde, A.,Bengoa-Luoni, S. A., & Clemente, M. (2019). PlantHsp90 is a novel adjuvant that elicits a strong humoral and cellular immune responseagainst B-and T-cell epitopes of a Toxoplasma gondii SAG1 peptide. Parasites& vectors, 12(1), 140.