EVALUACIÓN DE LA PATOGENICIDAD DE CEPAS DE Yersinia enterocolítica: PRESENCIA DE GENES POR PCR MULTIPLEX Y PRUEVAS DE VIRULENCIA.

CORIGLIANO, MARIANA G; FAVIER, GABRIELA; ESCUDERO, MARÍA ESTHER; STEFANINI DE GUZMÁN, ANA MARÍA

Córdoba

Conferencia; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

Yersinia enterocolítica es un enteropatógeno que incluye 6 biotipos, B, más 60 serotipos, siendo los más asociados a infección en humanos los biotipos 1 B, 2, 3 y 4 y los serotipos O:3, O:9 y O:8. Su patogenicidad es atribuida a factores de virulencia codifocados a nivel de un plásmido, y a nivel cromosomal. El objetivo de este trabajo fue evaluar la presencia de genes de virulencia mediante reacción en cadena de la polimerasa múltiple, PCRm, y mediante la utilización de pruebas de virulencia in vitro (PV), para la identificación de cepas patógenas de Y. enterocolítica. Se ensayarons diez cepas de Y. enterocolítica aisladas de alimentos y de muestras humanas en la ciudad de San Luis, Argentina. Se diseñaron oligonucleótidos específicos para los genes virF (433 pb), invA (558 pb), ail (370 pb), htrA (123 pb), yst (192 pb). Mezcla de reacción:muestra 3 ml, dNTPs 1 ml, MgCl2 5 ml, buffer 10x 5ml, oligonucleótidos 0,2 ml t Taq polimerasa 0,25 ml. Condiciones térmicas: 1 ciclo a 94 ˚C 3 min, 35 ciclos a 94 ˚C 1,5 min, 58 ˚C 1,5 min, 72 ˚C 1 min y 1 ciclo a 94 ˚C 7 min. Se ensayaron las siguientes pruebas de virulencia: autoaglutinación en caldo Rojo de metilo- Voges Proskaver, RM-VP, captación de rojo de congo y dependencia de calcio en agar rojo congo-oxalato de magnesio, CR-MOX, y en agar rojo congo/tripticase soja, CR-TSA; Pirazinamidasa en agar pirazinamida, P, e hidrólisis de esculina en agar esculina bilis, E. Las cepas de Y. enterocolítica B2 O:9, fueron positivas para la banda correspondiente a los genes virF e invA, mientras que las cepas de Y. enterocolítica B1A mostraron la banda correspondiente al gen yst. Cepas pertenecientes a los bioserotipos patógenos quedaron en evidencia por presencia de turbidez a 22˚C y ai=utoaglutinación a 37˚C, en caldo RM-VP; predominio de colonias rojas diminutas en CR-MOX, y ausencia de cambio de color en los medio P y E. Se observó total concordancia entre resultados por PV y PCRm. CONCLUSIÓN: Las pruebas de virulencia in vitro, podrían ser usadas como pruebas preliminares de tamiz para identificar aislamientos de Y enterocolítica que por su potencial patógenos necesitan futuras investigaciones complejas y técnicas moleculares costosas como PCRm..