Diferenciación de orígen plasmídico o cromosomal del gen d ela enterotoxina (cpe) de cepas de C. perfringens aisladas de alimentos en san luis

CORIGLIANO, MARIANA G; STAGNITTA PATRICIA V; STEFANINI DE GUZMÁN ANA MARÍA

Córdoba

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

Sociedad Argentina de Microbiología

Aproximadamente 5% de las cepas de Clostridium perfringens tipo A poseen el gen cpe que codifica para la enterotoxina. Esas cepas  “cpe-positivo” constituyen una de las causas más importantes de diarreas asociadas a intoxicaciones alimentarias y algunos casos de diarreas no asociadas a alimentos en humanos, así como ciertos casos de gastroenteritis en animales. Los estudios anteriores han determinado que los aislamientos de C. perfringens tipo A enterotoxigénicos que causan enfermedad gastrointestinal humana no asociada a alimentos y las enfermedades de origen veterinario llevan sus genes cpe en plásmidos, mientras que los aislamientos del tipo A causantes de intoxicación alimentaria en humanos llevan el gen cpe a nivel cromosomal. El objetivo de este trabajo fué desarrollar un ensayo de PCR duplex que permita distinguir entre origen plasmídico y cromosomal del gen cpe a partir de cepas enterotoxigénicas de C. perfringens tipo A aisladas de alimentos en San Luis. Se utilizaron 15 cepas enterotoxigénicas aisladas de alimentos cárnicos tales como hamburguesas, carne molida y chorizos; condimentos, especias; sopas y caldos deshidratados. Se efectuó el aislamiento de DNA previo subcultivo de las cepas en caldo tioglicolato en condiciones de anaerobiosis. En base a la organización del locus cpe de aislamientos que llevan el gen a nivel plasmídico, se utilizó un par de primers que genera un producto de PCR de aproximadamente 3,3 Kb. En base a la organización del locus cpe de aislamientos que llevan el gen a nivel cromosomal, se utilizó un par de primers que genera un producto de PCR de aproximadamente 2,1 Kb. Las condiciones de amplificación fueron las siguientes: 1) un ciclo de 94ºC durante 5 min. 2) 34 ciclos de 94ºC durante 30 seg., 63ºC durante 60 seg y 72ºC durante 180 seg. 3) un ciclo de 94ºC durante 90 seg., 60ºC durante 90 seg. y 72ºC durante 7 min., los productos de la PCR duplex fueron detectados con bromuro de etidio previa electroforesis en gel de agarosa al 1,5%. El 100% de las 15 cepas enterotoxigénicas estudiadas demostraron llevar el gen de la enterotoxina en su cromosoma. Este hecho eleva el riesgo de intoxicación alimentaria de estas cepas y de los alimentos desde los que se aislaron las mismas ya que estudios anteriores han demostrado que los aislamientos a partir de intoxicaciones alimentarias en humanos llevan el gen en el cromosoma. La disponibilidad de este rápido ensayo de genotipificación de cpe, capaz  de  aplicarse a un gran número de muestras constituye una poderosa herramienta tanto para el diagnóstico como para la epidemiología de esta bacteria poco investigada en nuestro país.