Determinación del daño genotóxico por SH2 producido por la bacteria sulfito reductora Clostridium perfringens mediante el ensayo Cometa modificado.

CORIGLIANO, MARIANA G; STAGNITTA PATRICIA V

Universidad Nacional de San Luis

Jornada; 2° Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular; 2006

Departamento de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia. UNSL.

Introducción: En trabajos previos se ha visto que el SH2  producido por bacterias sulfito reductoras actúa como un agente genotóxico y representa un ambiente agresivo al epitelio intestinal, contribuyendo potencialmente al padecimiento de desórdenes intestinales crónicos. Clostridium perfringens es una bacteria anaerobia sulfito reductora y forma parte de la microbiota colónica normal. El  SH2 no es un compuesto genotóxico en  condiciones estándar del ensayo Cometa, sin embargo, cuando se inhibe un mecanismo de reparación de ADN, se observa un marcado efecto genotóxico. El ensayo Cometa o Electroforesis en Gel de Células Únicas  (SCGE) es un método sensible, rápido y de bajo costo para cuantificar daño en el ADN de células individuales. El ensayo Cometa Modificado (ECM) utiliza un control positivo para comparar el daño de las células a evaluar con células tratadas con etilmetano sulfonato y bromuro de potasio 4hs antes del  ensayo, y un tratamiento,en las células a evaluar, con Hidroxiurea  y 1-b-D arabinofuranosilcitocina (Ara C), para determinar si la observación negativa previa fue debido a la pérdida de la genotoxicidad del sulfuro o consecuencia de la reparación activa. Objetivo: El objetivo de este estudio teórico es evaluar la posibilidad de la utilización del ensayo Cometa Modificado para determinar el daño genotóxico causado por SH2 producido por C. perfringens. Discusión: Se podría realizar el ensayo Cometa Modificado, en células de intestino de ratas Wistar obtenidas por perfusión, a las que previamente se les inhibiría un mecanismo de reparación de ADN y se correlacionarían estos resultados con las tinciones de los ensayos DAPI (4´,6´-diamino-2-phenylindole hidrochloridre) y TUNEL (Tdt-mediated dUTP Nick-End Labeling) los cuales evalúan la  fragmentación de ADN. Existen muy pocos antecedentes de la utilización de esta técnica en microbiología. Se sabe que hay relación entre las afectaciones que puede sufrir el material genético y la aparición de enfermedades como el cáncer. Esta técnica, debido a su rapidez y bajo costo sería muy útil en la determinación de la genotoxicidad del SH2 producido por C.perfringens en células en las cuales un mecanismo de reparación del ADN está inhibido.