Apoptosis inducida por interferón-a2b (IFN) en un modelo de preneoplasia hepática: participación de Akt, FoxO3a y la vía Wnt/b-catenina

PARODY J P; ALVAREZ M L; CEBALLOS M P; FRANCÉS D E; CARNOVALE C E; CARRILLO M C

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2011

En trabajos previos demostramos que el tratamiento in vivo con IFN produce la atenuación de la vía Wnt/beta-catenina en un modelo de preneoplasia hepática en rata. Además, observamos disminución de los focos preneoplásicos por un proceso apoptótico mediado por especies reactivas del oxígeno (ROS) inducidas por IFN. FoxO3a es un factor de transcripción regulado en múltiples niveles que transcribe genes pro-apoptóticos tales como Bim, PUMA, p27Kip1 y bNIP3. Decidimos estudiar la participación de FoxO3a en los eventos descriptos anteriormente.Grupos experimentales: IP, animales con preneoplasia hepática; IP+IFN, animales IP con tratamiento de IFN e IP+IFN+A, animales IP+IFN que recibieron ácido ascórbico (A) durante el tratamiento. Por inmunoblotting en fracción citosólica encontramos disminución de pAkt (forma activa de Akt. IP+IFN: -82%*; IP+IFN+A: -92%*) y de pFoxO3a (forma inhibida de FoxO3a. IP+IFN: -68%*; IP+IFN+A: -79%*) respecto a IP. No hubo cambios en los niveles de Akt total. En fracción nuclear observamos aumento de Foxo3a en el grupo IP+IFN (+210%*) respecto a IP. Mediante estudios de coinmunoprecipitación demostramos mayor asociación de beta-catenina a TCF en IP e IP+IFN+A y de beta-catenina a Foxo3a en IP+IFN. Por sqRT-PCR encontramos expresión de genes pro-apoptóticos blancos de FoxO3a (Bim, PUMA, p27Kip1 y bNIP3) en los grupos IP+IFN e IP+IFN+A y ausencia en IP. El tratamiento con A disminuyó la expresión de PUMA (-35%*) y bNIP3 (-89%*) respecto a IP+IFN. Los datos sugieren que el tratamiento in vivo con IFN regula negativamente la activación de Akt por un mecanismo no mediado por ROS. Por otro lado, tras la presencia de ROS y el menor índice de fosforilación de FoxO3a mediado por Akt, este factor se transloca al núcleo donde transcribe genes relacionados con la apoptosis celular. La presencia de ROS estimula la unión de beta-catenina a FoxO3a resultando en una actividad transcripcional mayor para algunos de estos genes y atenuando la actividad de TCF. *p<0,05