INVESTIGADORES
VASILE Franco Emanuel
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de la actividad enzimática de lipasa pancreática mediante análisis instrumental del color
Autor/es:
MARCOS SEBASTIÁN ORTEGA; FRANCO EMANUEL VASILE; MARÍA ALICIA JUDIS
Lugar:
Presidencia Roque Sáenz Peña - Chaco
Reunión:
Jornada; Reunión de difusión de la labor docente, científica y tecnológica y de extensión 2017; 2017
Institución organizadora:
Universidad Nacional del Chaco Austral
Resumen:
Las lipasas (EC 3.1.1.3, triacilglicerol éster hidrolasas), son enzimas de gran importancia tecnológica. A pesar de la amplia variedad de técnicas existentes para la caracterización de su actividad, los métodos comúnmente empleados son laboriosos, lentos y requieren reactivos y equipamientos muy especializados. Por ello, el objetivo de éste trabajo fue evaluar la aplicabilidad del análisis instrumental del color, como una alternativa rápida y eficiente para la determinación de los parámetros cinéticos que describen la actividad de la lipasa pancreática. Para ello, se prepararon emulsiones de aceite de oliva (2, 5 y 10% p/p) en suspensiones acuosas de proteína de suero lácteo (1%, p/v), a las que se adicionó 0,5 ml de fenolsulfonftaleina (indicador ácido/base) y 1 ml de extracto enzimático (5%, p/v). El cambio en la coloración de la mezcla reaccionante, debido al descenso de pH como consecuencia de la liberación de ácidos grasos, fue monitoreado en un colorímetro con esfera integradora durante 30 min a intervalos regulares, con homogenización entre cada lectura para reducir los errores debido a la desestabilización de las emulsiones. Las variaciones en las coordenadas cromáticas mostraron una marcada disminución en el parámetro a* (grado de rojo), correspondiéndose al cambio del color del indicador. La variación de las unidades cromáticas (UC) se ajustaron a modelos de regresión no lineal (R2>0,9), permitiendo la obtención de parámetros característicos (constantes de velocidad y valor en el equilibrio). Las velocidades de reacción a distintas concentraciones de sustrato se ajustaron al modelo de Michaelis-Menten (R2=0,99) de donde se obtuvo la velocidad máxima en condiciones saturantes (Vmáx=0,26 ± 0,00 UC/min) y la constante del modelo (Km=1,20 ± 0,03 %). Estos resultados advierten la utilidad del análisis instrumental del color como un método alternativo, rápido y eficaz en la determinación de los parámetros cinéticos que permiten caracterizar la actividad enzimática de lipasas.