Regulación de la expresión de genes de síntesis del lipopolisacárido de Salmonella.

GERÉZ; RIVEIRO; GARÓFALO; MARIÁNGELES NOTO LLANA; GIACOMODONATO MN; QUIROGA ; SARNAKI

CABA

Jornada; XIV Jornada de Jóvenes Investigadores.; 2025

Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad de Buenos Aires

Salmonella Enteritidis y Typhimurium son las serovariedades más prevalentes en las salmonelosis de animales y humanas. Estas bacterias pueden circular entre humanos, animales y el ambiente, generando un impacto significativo en la salud pública, veterinaria y en la industria alimentaria. El LPS es un factor de virulencia clave para el proceso infectivo de estas bacterias. El gen wzzST, que regula la longitud del AgO del LPS, se encuentra inmediatamente río abajo y en misma orientación que el gen ugd, separados por una región intergénica (RI) de 142 nt. Previamente, observamos que, a diferencia de S. Typhimurium, S. Enteritidis expresa wzzST incluso en ausencia de sus reguladores conocidos, PmrA y RcsB. Además, estudios preliminares sugieren un sitio alternativo de inicio de transcripción, posiblemente vinculado a un ARNm policistrónico con ugd. En este trabajo, nos propusimos caracterizar la región reguladora responsable de la expresión del gen wzzST independiente de los factores, PmrA y RcsB. Para esto, se realizaron ensayos de RT-PCR a partir de la extracción de ARN total de las cepas mutante ∆rcsB∆pmrA y su parental salvaje de S. Enteritidis de aislamiento a partir de alimentos de origen aviar cultivada en medios que imitan condiciones de la vía natural de infección de Salmonella. Los ensayos de RT-PCR empleando primers para las regiones de wzzST, ugd y la RI luego de una RT con un primer específico de wzzST, revelaron que ambas cepas cultivadas en LB muestran productos correspondientes a las tres regiones estudiadas. Al cuantificar los niveles de expresión de dichos productos mediante q-PCR encontramos que en la cepa ∆rcsB∆pmrA se expresan hasta un 34% con respecto a los de la cepa parental. Estos resultados indicarían que wzzST se expresa en ausencia de los dos reguladores conocidos y que su inicio de la transcripción ocurre en el gen ugd. Además, se observó que la expresión es más eficiente en presencia de al menos uno de los dos reguladores. Al evaluar la transcripción de la RI frente acondiciones de estrés (medio mínimo con baja o alta concentración de Mg2+) realizando RT con random primers, se observó que el producto de PCR fue detectable en la cepa salvaje en ambas condiciones, pero no en la mutante. Este mismo resultado se obtuvo cuando se amplió la zona de detección abarcando los últimos 313 nt de ugd (un tercio del final del gen). Este resultado, sugiere que, existe un ARNm que comienza en un sitio más distante al descripto previamente, que se expresa en ambas condiciones de estrés y que depende de al menos uno de los dos reguladores en dichas condiciones sin descartar la existencia de un tercer regulador. En conjunto, nuestros resultados apoyan un modelo en el cual la expresión del gen wzzST en S. Enteritidis podría estar modulada también por la existencia de otra región reguladora dentro del gen ugd o ser el propio promotor de ugd produciendo un ARNm policistrónico que abarca ambos genes.