INVESTIGADORES
MARTINEZ CALEJMAN Camila
congresos y reuniones científicas
Título:
DISFUNCIÓN MITOCONDRIAL Y METABOLISMO LIPÍDICO EN UN MODELO DE ESTEATOHEPATITIS: EFECTO DEL TRATAMIENTO CON HEMINA
Autor/es:
WISZNIEWSKI, MORENA; MARTINEZ CALEJMAN C; CYMERYNG C. B.; ESTEBAN MARTIN REPETTO
Lugar:
ciudad autonoma de buenos aires
Reunión:
Congreso; XXII Congreso Argentino de Hepatologia; 2023
Institución organizadora:
Congreso Argentino de Hepatologia
Resumen:
DISFUNCIÓN MITOCONDRIAL Y METABOLISMO LIPÍDICO EN UN MODELO DE ESTEATOHEPATITIS: EFECTO DELTRATAMIENTO CON HEMINAIntroducción:La prevalencia de la enfermedad hepática grasa asociada a disfunción metabólica (EHGADM) es de proporcionesepidémicas. Resultados previos de nuestro laboratorio indican que la administración a ratas de una dieta rica ensacarosa (DRS) por 12 semanas se asocia con el desarrollo de esteatohepatitis sin fibrosis, acompañado deinsulinorresistencia (IR) tanto periférica como hepática, dislipemia y a nivel tisular a un aumento en mecanismoscelulares de injuria. El tratamiento con hemina, un reconocido inductor farmacológico de la enzima hemooxigenasa–1 (HO-1) fue eficaz en revertir el daño histológico (ballooning), estrés oxidativo y de retículo, la muertecelular, la inflamación y la hipertrigliceridemia sin modificar parámetros de IR periférica, el peso o el consumocalórico. Considerando los resultados previos y que varios estudios han sugerido que la disfunción mitocondrial estáinvolucrada en el desarrollo y progresión de EHGADM, el objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto deltratamiento farmacológico sobre el bienestar mitocondrial y su asociación con el metabolismo lipídico hepático eneste modelo.Materiales y métodos:Diseño: ratas Wistar macho adultas (~200g) fueron alimentadas con alimento estándar y agua (grupo control, C) ocon una solución al 30%p/v de sacarosa en el agua de bebida (grupo DRS) ad libitum por 12 semanas. Un subgrupode animales DRS, a partir de la semana 10 recibió también hemina (15mg/kg/48h, ip, grupo DRS+H).Al finalizar el periodo experimental, los animales fueron sacrificados y se recolectó el tejido hepático.Aislamiento de ARN y PCR en tiempo real (qPCR): se obtuvo ARN total de 50mg de tejido utilizando el reactivoQuickzol® de acuerdo con las instrucciones del fabricante (Kalium Technologies, Argentina). La transcripción reversase realizó empleando la transcriptasa reversa MMLV (Life Technologies, Argentina). Las reacciones de qPCR fueronrealizadas en Rotor-Gene 6000 (Corbett Research, Australia) y cuantificadas con el software del fabricante. Laexpresión génica fue normalizada a actina, utilizando el método de cuantificación relativa con corrección deeficiencia.Inmunoblotting: 80µg de homogenatos de hígado en buffer RIPA, fueron cargados en geles de 10 o 12%. Luego de laelectroforesis, las proteínas fueron transferidas a membranas de PVDF por 30 minutos a 15 voltios en un sistema detransferencia semi-seco. Las membranas transferidas fueron bloqueadas con leche descremada (5% en TTBS, 1 hora)y luego incubadas con el anticuerpo primario correspondiente (4°C, ON). Tras varios lavados, las membranas fueronincubadas con el anticuerpo secundario correspondiente. Se cuantificaron las bandas específicas reveladas porquimioluminiscencia empleando el GeneGenome XRQ (Bangalore, India) y el software FluorChem.Microscopía electrónica de transmisión (MET): las muestras hepáticas fueron fijadas en glutaraldehído 2.5% enbuffer A (buffer fosfato 0.1M pH 7.4) por 4h a 4°C. Se realizaron lavados de 15 minutos con buffer A y luego fueronprocesados en el servicio de MET del IBCN–LANAIS (CONICET). Las imágenes fueron capturadas en un MET Zeiss EM109T con cámara digital Gatan ES1000W.Análisis estadístico: la distribución de los datos se analizó mediante la prueba de Shapiro-Wilk. Los resultados condistribución paramétrica se expresaron como media±SEM y los no paramétricos, como mediana y rango. Lasdiferencias entre los grupos fueron analizadas por ANOVA de una vía o Kruskal-Wallis según corresponda. Cuando seobtuvo una diferencia significativa en el ANOVA, se realizó una comparación post-test (prueba de Tukey o Dunn).Todos los datos fueron analizados utilizando GraphPad Prism 8 (GraphPad Software, Estados Unidos).Resultados:En los animales que recibieron la DRS por 12 semanas se detectó un aumento de la lipogénesis hepática, evaluadapor la expresión del factor de transcripción ChREBP, CD36 y de enzimas claves de la síntesis de ácidos grasos, comoFAS y ACC1 (p