INVESTIGADORES
PEREZ Luis Orlando
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización molecular de prepropéptidos presentes en la piel de Hypsiboas pulchellus (Anura: Hylidae)
Autor/es:
AGUILAR SILVINA; BRUNETTI A; LUIS ORLANDO PÉREZ; NATALIA L. CANCELARICH; BASSO, NÉSTOR G.; MARANI, MARIELA MIRTA
Reunión:
Jornada; IIX Jornada de Becarios; 2017
Resumen:
Los péptidos antimicrobianos (PAMs) son un componente esencial en la defensa de organismos, destinados a evitar la proliferación de patógenos invasores y microoganismos comensales. En general tienen menos de 100 residuos de aminoácidos, carga neta positiva y son anfipáticos. La piel de los anfibios representa una diversa fuente de PAMs. En el presente trabajo se identificaron y caracterizaron prepropéptidos a partir del ARNm extraído de la piel de Hypsiboas pulchellus (Hpc) empleando técnicas de biología molecular, con el fin de comparar con los péptidos presentes en la secreción de la piel de Hpc previamente identificados de novo mediante HPLC-MSMS. Para ello, se extrajo el ARN de un espécimen adulto de Hpc, se utilizó como molde para la síntesis de cDNA, y se amplificó por PCR, utilizando primers específicos. Los productos de PCR fueron ligados al vector pCRTM 4-TOPO y se incorporaron a células competentes de E. coli DH5α. Después de la selección y crecimiento de colonias bacterianas, los plásmidos se purificaron, se evaluaron los tamaños de los insertos,y secuenciaron varios fragmentos. Se obtuvieron dos nuevos prepropéptidos cuyos péptidos maduros, denominados Hpc-1D-10 (FLGALIPAIAGAIGGLIRKG) y Hpc-1D-11 (FLGALIPAAIGLISGLIKKG), presentaron carga neta positiva y peso molecular de 1908.36 y 1952.45 Da respectivamente. El análisis informático determinó una conformación de tipo α-hélice para ambos. Los resultados de las alineaciones demostraron una similitud del 63 % de Hpc-1D-10 con Hylin b2, identificado en la especie Hypsiboas lundii y del 56% para Hpc-1D-11 con Brevinin-1Ja de la especie Rana japonica. Dichas secuencias contienen a varios de los péptidos previamente identificados por HPLC-MSMS, lo que indicaría que ocurre un proceso de degradación y/o clivaje específico enzimático una vez secretados. A partir de estos resultados, se continuará con la síntesis química de los péptidos y la evaluación de su actividad antimicrobiana, hemolítica y citotóxica.