Comparación de la sensibilidad de diferentes protocolos de PCR para la detección del Virus del Papiloma Humano (VPH) utilizando los cebadores MY09/11-GP5+/6+: Su utilidad en el análisis de muestras de cérvix y colon.

PÉREZ LO, DULOUT FN, GOLIJOW CD.

San Luis, Argentina

Congreso; XXXV Congreso Argentino de Genética; 2006

La infección por VPH está asociada a carcinomas genitales y recientemente se ha encontrado evidencia sobre su papel en otros sitios anatómicos. El ensayo de PCR anidado My/Gp+ es la técnica más extendida para la detección del VPH, permitiendo la identificación de la mayoría de los tipos virales de interés clínico. Con el fin de comparar diferentes estrategias de PCR se analizaron diluciones de la línea celular Hela (VPH-18) en agua destilada y con contraste de ADN heterólogo (MRC5). Además, se estudiaron muestras clínicas correspondientes a hisopados cervicales y carcinomas colorrectales. Las estrategias de amplificación fueron tres: PCR anidado convencional, PCR anidado secuencial y PCR directo (Gp5+/6+). La genotipificación fue realizada por polimorfismo en la conformación de cadenas simples (SSCP) o por hibridización reversa. Para las tres técnicas la sensibilidad en la detección del VPH fue inversamente proporcional a la dilución utilizada, no existiendo interferencia por la utilización de ADN de fondo. El protocolo de PCR anidado clásico pudo detectar hasta 30 partículas virales por reacción, mientras que la PCR secuencial y directa pudieron detectar alrededor de 300 copias por reacción. En las muestras cervicales, la PCR anidada y secuencial demostraron una sensibilidad similar (9/20), mientras que la PCR directa fue menos sensible (3/20). En los tumores de colon, la PCR anidada clásica (6/20) presentó una mayor sensibilidad en la detección respecto de la técnica secuencial (5/20). De acuerdo a los resultados obtenidos, el sistema anidado clásico puede resultar beneficioso para evaluar las muestras aparentemente negativas y para la investigación de infecciones extragenitales