DESARROLLO Y VALIDACIÓN DE UN NUEVO MÉTODO ANALÍTICO PARA LA DETERMINACIÓN SIMULTÁNEA DE ALBENDAZOL Y PRAZIQUANTEL

ROSAS, MELANY; RAMÍREZ-RIGO, M. VERÓNICA; PIQUERAS, CRISTIAN; BUCALÁ, VERÓNICA; RAZUC, MARIELA F.

Buenos Aires

Congreso; XIV Jornadas de Farmacia y Bioquímica Industrial; 2019

Asociación Argentina de Farmacia y Bioquímica Industrial

Introducción: El albendazol (ABZ) es un antiparasitario benzoimidazólico que se utiliza ampliamente en medicina veterinaria. Entre sus ventajas se pueden citar su amplio espectro de acción y el hecho de que, al ser metabolizado, da como resultado metabolitos que también poseen actividad antihelmíntica (García et al., 1999). ABZ es muy utilizado en combinación con praziquantel (PZQ), un derivado isoquinolínico, con el propósito de asociar el potente efecto nematicida del primero con la actividad tenicida del segundo. Además, se ha reportado que el PZQ aumenta la biodisponibilidad del ABZ, hecho que optimiza la farmacoterapia por vía oral (García et al., 2011). Dicha combinación se formula en comprimidos y suspensiones de uso veterinario. Los controles de calidad de las mismas incluyen, entre otros, valoración de principio activo y estudios de disolución. Se han propuesto previamente dos métodos analíticos para la determinación simultánea de ambos analitos, los cuales emplean HPLC con detección UV (Shah et al.2014; Vignaduzzo et al.2015). Los mismos fueron validados mostrando resultados aceptables. Sin embargo, en ciertos casos se requieren límites de cuantificación inferiores a los obtenidos en dichos métodos, por ejemplo, en estudios de perfiles de disolución de nuevas formulaciones. Además, los mencionados métodos no son aptos para implementar un análisis automatizado de los analitos. El objetivo del presente trabajo es desarrollar y validar un nuevo método analítico destinado a cuantificar simultáneamente ABZ y PZQ, basado en HPLC con detección UV, el cual sea rápido, simple y presente bajos límites de cuantificación y detección. Materiales y Métodos: Se utilizó ABZ, PZQ y los excipientes Eudragit EPO (EEPO) y Etilcelulosa (EC). Para la preparación de la fase móvil se utilizó fosfato de potasio monobásico, agua tridestilada y acetonitrilo (ACN). El medio de disolución se preparó con HCl 1N y cloruro de potasio según Farmacopea, y se ajustó el pH con ácido ortofosfórico 10% v/v (USP 41 NF 36, 2018). Todas las muestras y medios fueron filtrados mediante filtros de membrana de PVDF de 0,45 μm. Se empleó un equipo de HPLC de inyección automática, con detector UV. Para la separación de los analitos se utilizó una columna cromatográfica C18 (150 mm x 4.6 mm, tamaño de partícula 5.0 μm). La fase móvil consistió en una mezcla 50:50 v/v de ACN:buffer fosfato de potasio (30 mM, pH 2,9), el flujo fue de 1 mL/min y la temperatura de 30°C. El volumen de inyección fue de 20 μl. El análisis se llevó a cabo a una longitud de onda de 225 nm. Los estándares de calibración fueron preparados en fase móvil en los rangos 0,1-80,0 μg/mL y 2,0-100,0 μg/mL para ABZ y PZQ, respectivamente. Durante la validación del método se determinaron la linealidad, precisión y exactitud en los rangos estudiados, así como la especificidad con respecto a los excipientes utilizados, límite de detección (LD) y límite de cuantificación (LC). Adicionalmente, se prepararon soluciones conteniendo los principios activos y excipientes de una formulación nueva en desarrollo en medio de disolución dentro del rango estudiado, a los cuales se les determinó la exactitud y precisión. Resultados: Las ecuaciones de la recta para ambos analitos presentaron un R2 de 0.999 para ambos ABZ y PZQ. Los tiempos de retención obtenidos fueron de 4.7 min y 6.6 min para ABZ y PZQ, respectivamente. La inyección de los excipientes de la formulación no presentó picos en los tiempos de retención de los analitos, obteniéndose diferencias no significativas (con un 95% de confianza) en la cuantificación de ambos fármacos en ausencia o presencia de los excipientes. La precisión y exactitud fueron aceptables para ambos analitos. En este sentido, la exactitud se encontró en el rango 96.4-101.3% para ABZ y 98.0-101.3% para PZQ, mientras que la precisión fue menor al 2% en ambos casos para todos los niveles estudiados (superior, medio e inferior). Los LD y LC fueron de 0,04 y 0,11 µg/L para ABZ y 0,49 y 1,48 µg/L para PZQ. En este caso, los límites para ABZ fueron al menos un orden de magnitud inferior a los reportados en bibliografía, mientras que el PZQ presentó resultados dentro del mismo orden de magnitud. Las soluciones preparadas a partir de los componentes de la formulación en el medio de disolución fueron inyectadas directamente, solamente con un paso de filtración previo. Las mismas no presentaron cambios en los tiempos de retención, encontrándose sus porcentajes de recuperación entre 97.5-103.5% para ABZ y 98,3-102,9% para PZQ, con RSD menores al 2% para ambos en todos los niveles estudiados (superior, medio e inferior). Conclusión: Se desarrolló y validó un nuevo método analítico para la determinación de ABZ y PZQ utilizando HPLC con detección UV. El mismo presentó resultados aceptables en el proceso de validación. Los tiempos de retención del mismo fueron bajos (< 6.6 min) y fue posible reducir significativamente los límites de detección y cuantificación de ABZ. Adicionalmente, se logró llevar a cabo la determinación en medio de disolución con valores aceptables, sin la necesidad de diluir previamente la muestra en fase móvil, lo cual permitirá llevar a cabo inyecciones directas de las soluciones y facilitar el proceso de automatización del análisis, hecho que significa una ventaja comparado con lo reportado previamente en bibliografía. Agradecimientos: La Secretaría de Políticas Universitarias, UNS, CONICET y ANPCyT financian este trabajo. Se agradece a T. Odoux (PLAPIQUI) por su asistencia técnica. M. Rosas agradece la beca doctoral CONICET.