Expresión de factor de coagulación VIII humano en células animales mediada por vectores lentivirales

FONTANA, D., ATTALLAH, C., BÜRGI, M., GUGLIOTTA, A., PRIETO, C., ETCHEVERRIGARAY, M. Y KRATJE, R.

Santa Fe

Congreso; 1º Congreso Bioquímico del Litoral; 2011

Colegio de Bióquímicos de Santa Fe (1º circ.) - CoFontana, D., Attallah, C., Bürgi, M., Gugliotta, A., Prieto, C., Etcheverrigaray, M. y Kratje, R. BER

   La hemofilia A es una enfermedad genética hereditaria causada por una reducción en la cantidad y/o actividad del factor VIII (fVIII) de coagulación sanguínea. Este desorden hematológico, causado por defectos en el gen del fVIII, se manifiesta con episodios de sangrado espontáneos y la severidad se correlaciona con el nivel de actividad residual del fVIII. El tratamiento involucra infusiones intravenosas crónicas de productos conteniendo fVIII derivado de origen humano o de proteínas recombinantes. Muchas características de la hemofilia A la hacen apropiada para el desarrollo de una estrategia terapéutica basada en la transferencia de material genético. Durante la última década, los vectores lentivirales se han convertido en una herramienta de transferencia de material genético muy valiosa, por transducir células y sostener la expresión del transgen durante períodos prolongados.    En este trabajo se construyó un vector lentiviral conteniendo la secuencia codificante del fVIII humano. Se transdujeron células CHO y se evaluó la capacidad de dicho vector de producir en forma constitutiva y estable el fVIII humano. Cabe resaltar que dicha proteína tiene una vida media de 2 horas, motivo por el cual es de gran importancia contar con un sistema apropiado de expresión. Los experimentos revelaron que a través de este sistema es posible sintetizar fVIII humano a partir de líneas celulares establecidas a razón de 3,2 IU/ml.d.106cél. o 287 ng/ml.d.106cél. Los sobrenadantes de las líneas celulares fueron evaluados por ensayos de actividad biológica y ELISA, utilizando anticuerpos mono- y policlonales desarrollados en nuestro laboratorio. Finalmente, podemos concluir que, a partir de los resultados obtenidos se cuenta con un sistema de expresión de fVIII humano que puede ser utilizado tanto para producir la proteína en forma recombinante o bien para ser ensayado en protocolos de transferencia de material genético.