INVESTIGADORES
ATTALLAH Carolina Veronica
artículos
Título:
Empleo de distintos péptidos señales para expresión de proteínas recombinantes en células HEK293, NS0 y CHO-K1.
Autor/es:
ATTALLAH, C.; ETCHEVERRIGARAY, M.; OGGERO, M.
Revista:
FABICIB
Editorial:
Revista de la Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional del Litoral
Referencias:
Lugar: SANTA FE; Año: 2015 vol. 19 p. 138 - 140
Resumen:
La demanda de proteínas terapéuticas recombinantes se expande significativamente.Existe, por lo tanto, una constante necesidad de incrementar la productividad de laslíneas celulares empleadas para su obtención mediante el desarrollo de modificacionesque optimicen su producción. Por un lado, las células CHO (Chinese Hamster Ovary)son las más utilizadas para tal fin, aunque también se emplean otros tipos de células,como HEK (Human Embrionic Kidney) y NS0 de mieloma de ratón. Por otro lado, lospéptidos señales (SPs), capaces de dirigir eficazmente la secreción de proteínas, sonelementos claves en la producción de proteínas recombinantes. Hasta el momento, losestudios realizados para evaluar la eficiencia en la secreción de diferentes SPs se hanfocalizado en el empleo de células CHO, por lo que resulta atractivo evaluar y comparardicha eficiencia en otros tipos de células de mamífero. Se construyeron 8 moléculas,productos de la combinación de 4 SPs: AZ (human azurocidin preproprotein), mSA(modified human serum albumin), mIgk C (modified Cricetulus griseus Ig kappa chainV-III region MOPC 63-like precursor), y mIgk H (modified human Ig kappa chain V-IIIregion VG precursor); y 2 proteínas: GFP (green fluorescent protein) y una proteína defusión scFv-Fc. Se realizaron transfecciones en forma transiente y estable de célulasCHO-K1, HEK293 y NS0. La eficiencia en la secreción de cada SP se evaluó porcitometría de flujo y microscopía de fluorescencia, en el caso de la GFP, y por ELISAespecífico indirecto, en el caso de la proteína scFv-Fc. Las productividades más altasse obtuvieron con los SPs derivados de mSA y de mIgk H. En este trabajo se demostróque dependiendo del SP empleado en la expresión de una proteína recombinante, fueposible mejorar hasta 5 veces la productividad celular, y que el SP mSA resultóeficiente para todos los tipos celulares empleados.