Activación de la PMCA por dilución. Estudio en microsomas de células de insecto.

LAURA VANAGAS; CARIDE A.J.; ROSSI J.P.F.C.

Mar del Plata

Congreso; XXXIII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB) y Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

La bomba de calcio de membrana plasmática (PMCA), es una proteína de 127000-134000 que se encuentra en todas las células eucariotas. Es una P-ATPasa regulada por calmodulina, fosfolípidos ácidos, proteín quinasas, etc., codificada por una familia de multigenes. La PMCA no supera el 0.1% del total de proteínas de membrana, por lo que resulta difícil estudiarla en su entorno natural. Hemos descripto el efecto de la dilución de suspensiones de membranas de eritrocitos humanos, lo que produce la activación específica de la PMCA (Congreso SAB-SAIBMB, 2003). Recientemente se han sobreexpresado diferentes isoformas de PMCA en células de insecto (Sf9 y Sf21) mediante un baculovirus que produce una preparación de alta actividad específica. Este estudio se efectuó en preparaciones microsomales de Sf9 o Sf21 de la isoforma h4b, predominante en eritrocitos humanos. Se realizaron medidas de actividad enzimática, (Fiske y Subbarrow y Baginski), variando la concentración de proteínas totales lo que produce un aumento de la actividad específica entre 1.5 y 6 veces en las suspensiones diluidas respecto de las concentradas. Este efecto se manifiesta tanto en ausencia como en presencia de concentraciones saturantes de calmodulina. El estudio de la actividad de Ca2+-ATPasa, mediante el método cinético de Webb (PNAS, 89, 884, 1992) mostró que la actividad específica aumenta significativamente con la dilución de 0.02 a 0.038 mol Pi.mg prot-1.min-1 en 9.2 y 46 g/ml de proteínas totales, respectivamente, y, con el agregado de calmodulina, de 0.099 a 0.189 mol Pi.mg prot-1.min-1. La constante de activación por calmodulina fue de 0.012 y 0.035 s-1. Resultados preliminares indican que este fenómeno también aparece en la isoforma 2b. El fenómeno puede describirse como una actividad bifásica (activación- inhibición) dependiente del grado de expresión de la PMCA e independiente de la concentración de Ca2+ y calmodulina.