Caracterización de la histona H2Ba de Toxoplasma gondii

SILVINA S. BOGADO; MARIA C. DALMASSO; LAURA VANAGAS; SERGIO O. ANGEL

Ascochinga, Córdoba, Argentina.

Encuentro; XXIV Reunión Científica Anual, Sociedad Argentina de Protozoología; 2010

Sociedad Argentina de Protozoología (SAP)

Toxoplasma gondii es un parásito intracelular obligado agente causal de la Toxoplasmosis humana y animal. Durante su ciclo de vida pasa por diferentes estadios en los cuales se apagan y se encienden numerosos genes, expresándose proteínas que son estadio-específicas. Existen evidencias de mecanismos epigenéticos asociados a las histonas que podrían estar involucrados en el control de la expresión génica durante este proceso. T. gondii posee una histona canónica H2A1, dos variantes H2AZ y H2AX, dos H2B canónicas (H2Ba y H2Bb) y una variante H2Bv. Recientemente mostramos que H2Bv dimeriza con H2AZ pero no con H2AX en el estadio de taquizoito. A su vez observamos que H2Bv/H2AZ están localizadas en promotores de genes activos mientras que H2AX está en promotores de genes inactivos y regiones genómicas silentes. Para completar el modelo de nucleosoma en T. gondii en este trabajo se caracterizó a la histona H2Ba. Se expresó esta histona como proteína recombinante (rH2Ba), se purificó una proteína con una masa molecular aproximada de 17 kDa. Se utilizó esta proteína para inmunizar ratones. Se demostró que el anticuerpo obtenido αH2Ba presenta una gran especificidad para rH2Ba y que detecta una sola banda en lisado de taquizoito de masa molecular esperada (12.6 kDa). Se realizó inmunofluorescencia indirecta en parásitos intracelulares y extracelulares, crecidos in vitro en el estadio de taquizoito y se detectó señal en el núcleo en ambos casos. Para conocer si existe interacción entre la histona H2Ba y las variantes H2AZ y H2AX realizamos ensayos de co-inmunoprecipitación. La histona H2Ba se encuentra presente en el inmunocomplejo precipitado con αH2AX, lo que sugiere que ambas histonas estarían interaccionando, mientras que está ausente en el inmunocomplejo precipitado con el anticuerpo αH2AZ, lo que sugiere que no existiría una interacción entre éstas histonas o que la interacción existente entre estas dos histonas es muy baja.