INVESTIGADORES
VANAGAS Laura
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización de clones de la histona H2B.Z de Toxoplasma gondii
Autor/es:
LAURA VANAGAS; AGUSTINA GANUZA; SERGIO O. ANGEL
Lugar:
Chascomús
Reunión:
Congreso; XV Jornadas anuales de la Sociedad Argentina de Biología (SAB); 2013
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biología (SAB)
Resumen:
Toxoplasma gondii es un parásito intracelular obligado, que produce la toxoplasmosis, afectando principalmente a pacientes inmunodeprimidos y a recién nacidos. Dada la importancia de la cromatina en la modulación de la expresión génica y la replicación del ADN, en este trabajo nos focalizamos en la histona variante H2B.Z. Esta histona variante se encuentra acetilada en las lisinas K3, K8, K13, K14 y K18, modificaciones que podrían ser relevantes para su función. Se obtuvieron líneas estables de T. gondii expresando H2B.Z tipo salvaje y otra con todas las lisinas acetilables intercambiadas por alanina (aminoácido que no se acetila) fusionadas al tag de c-Myc, utilizando el vector pTUB8mycGFPftailTy/H. Las construcciones fueron transfectadas dentro de la cepa RHHXGPRTUPRT de T. gondii por electroporación. Esta cepa se puede cultivar en condiciones de estrés metabólico por falta de CO2 para obtener bradizoitos. Los parásitos transfectados estables se identificaron por inmunofluorescencia indirecta (IFI) usando anticuerpos contra las marcas de c-Myc, además de Western blot. Se obtuvieron 2 clones de cada línea (Myc-H2Bv 1 y 2 y Myc-H2BvK3,8,13,14,18A 1 y 2) los cuales fueron caracterizados. Como primer paso en la caracterización fenotípica se realizaron ensayos de replicación con los clones obtenidos. Los clones de la línea salvaje tuvieron un comportamiento similar a la línea parental, mientras que los clones de la línea mutante mostraron una leve deficiencia en la replicación. Las acetilaciones de la histona H2B.Z serían de importancia para conservar el fenotipo del parásito.