UV-MALDI-MS y ESI-MS como herramientas para la caracterización de los productos de fotosensibilización de desoxirribonucleótidos por norharmano

M. MICAELA GONZALEZ; FEDERICO RASSE SURIANI; MARIANA VIGNONI; M. PAULA DENOFRIO; J. GABRIEL YAÑUK; FRANCO M. CABRERIZO; ROSA ERRA-BALSELLS

Los Cocos, Cordoba

Congreso; Primer Congreso Argentino de Espectrometría de Masa (I CAEM); 2012

Las técnicas de espectrometría de masa UV-MALDI-MS (UV-Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry) y ESI-MS (Electrospray ionization mass spectrometry) comprenden métodos de ionización suaves, con escasa o ninguna fragmentación, y brindan información generalmente sobre el ion molecular. Presentan, además, una elevada sensibilidad (del orden de femtomol o átomomol). Dichas características las hacen adecuadas para el análisis de material genético (ADN 1,2, oligonucleótidos 3,4,5, etc), constituyendo esto una aplicación interesante en el campo del diagnóstico de enfermedades.             En el presente trabajo se las ha empleado para la caracterización de los productos de la oxidación fotoinducida de desoxirribonucleótidos por norharmano (nHo). El nHo (Esquema 1) pertenece a una familia de alcaloides, las β-carbolinas (βCs), presentes en una gran variedad de sistemas vivos 6,7,8. En un estudio reciente, hemos demostrado que bajo irradiación UV-A, ciertas βCs son capaces de inducir daño fotoinducido al ADN 9,10. Para obtener información sobre la reactividad de las βCs, en sus estados electrónicos excitados, con los monómeros que conforman la molécula de ADN (i.e., desoxirribonucleótidos), realizamos un estudio de fotosensibilización de 2?-desoxiadenosina-5?-monofosfato (dAMP) y 2?-desoxiguanosina-5?-monofosfato (dGMP), utilizando al nHo como fotosensibilizador, en solución acuosa y bajo irradiación UV-A (350 nm). Los fotoproductos obtenidos fueron caracterizados por las espectrometrías de masa UV-MALDI y ESI, utilizando en ambos casos un analizador de tiempo de vuelo (TOF). A pesar de las pequeñas cantidades de productos formados, gracias a la alta sensibilidad de dichas técnicas, pudo detectarse la presencia de 8-oxo-dAMP y 8-oxo-dGMP, ambos marcadores de daño oxidativo del material genético , sin necesidad de la separación de los productos ni la utilización de patrones. Referencias: 1- Zhu, Y.; Chung, C.; Taranenko, N.; Allman, S.; Martin, S.; Haff, L.; Chen, C.; Rapid Commun. Mass Spectrom. 1996, 10, 383?388. 2- Doktycz, M. J.; Hurst, G. B.; Habibi-Goudarzi, S.; Mcluckey, S. A.; Tang, K.; Chen, C. H.; Uziel, M.; Jacobson, K. B.; Woychik, R. P.; Buchanan, M. V.; Anal. Biochem. 1995, 230, 205?214. 3- Parr, G.; Fitzgerald, M.; Smith, L.; Rapid Commun. Mass Spectrom. 1992, 6, 369?372. 4- Wu, K.; Steding, A.; Becker, C.; Rapid Commun Mass Spectrom 1993, 7, 142?146. 5- Covey, T. R.; Bonner, R. F.; Shushan, B. I.; Henion; J. Rapid Commun. Mass Spectrom. 1988, 2, 249?256. 6- B. Hemmateenejad, B.; Abbaspour, A.; Maghami, H.; Miri; R.; M. R. Panjehshahin, M. R.; Anal. Chim. Acta, 2006, 575, 290?299. 7- Bais, H. P.; Park, S-W.; Stermitz, F. R.; Halligan, K. M.; Vivanco, J. M.; Phytochemistry, 2002, 61, 539?543. 8- Spijkerman, R.; van den Eijnden, R.; van de Mheen, D.; Bongers, I.; Fekkes, D.; Eur Neuropsychopharm., 2002, 12, 61?71. 9- Gonzalez, M. M.; Pellon-Maison, M.; Ales-Gandolfo, M. A.; Gonzalez-Baró, M. R.; Erra-Balsells, R. Cabrerizo, F. M.; Org. Biomol. Chem., 2010, 8, 2543?2552. 10- Gonzalez, M. M.; Vignoni, M.; Pellon-Maison, M.; Ales-Gandolfo, M. A.; Gonzalez-Baró, M. R.; Erra-Balsells, R.; Epe B.; Cabrerizo, F. M.; Org. Biomol. Chem., 2012, 10, 1807-1819.