INVESTIGADORES
PAVE Romina Elizabeth
congresos y reuniones científicas
Título:
Microscopía de fluorescencia confocal multiespectral aplicada al análisis de helmintiasis y alteraciones citohematológicas en murciélagos capturados en zonas urbanas y rurales de Entre Ríos, Argentina
Autor/es:
ULMAN SABRINA; PAVÉ ROMINA; ETCHART JUAN IGNACIO; SAAVEDRA SILVINA; SCHIERLOH PABLO
Lugar:
La Pampa
Reunión:
Jornada; XIII Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria. I Reunión de la Red Latinoamericana de Inmunología Veterinaria, FCV-UNLPam, La Pampa, Argentina; 2021
Institución organizadora:
Universidad Nacional de La Pampa, Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria
Resumen:
Debido a su particular regulación inmuno-metabólica, los quirópteros pueden albergar asintomáticamente altas cargas virales. Bajo el paradigma Th1/Th2, se ha planteado que coinfecciones helmínticas pueden atenuar la respuesta antiviral, incrementando el riesgo de zoonosis. Para entender mejor el rol ecoepidemiológico de murciélagos no-hematófagos, nuestro objetivo fué introducir nuevas metodologías basadas en microscopía de fluorescencia confocal para analizar helmintiasis y fenotipo leucocitario. Se realizaron capturas rurales y urbanas de varias especies provenientes de las familias Vespertilionidae (n=10) y Molossidae (n=12). Se tomaron muestras de sangre y heces antes de la liberación o se conservaron los órganos en 3% formol cuando especímenes seleccionados fueron sacrificados para ser depositados en la colección INALI (n=10). Los frotis de sangre fijada en metanol en campo se tiñeron con azul de Evans (EB)/DAPI. En muestras fecales e intestinales se caracterizaron huevos, larvas y/o adultos por microscopía de fluorescencia previa tinción EB/IP. Las imágenes se adquirieron en 4 modalidades (DIC, intensidad de fluorescencia, FLIM y multiespectral) con un microscopio confocal LSM880 (Zeiss) empleando el software ZEN-Black. Para el análisis automatizado se programaron rutinas en lenguaje Java en entorno ImageJ. Como técnica gold-standard se empleó microscopía óptica. Todos los intestinos analizados (n=10) presentaron helmintiasis (nematodos, trematodos y/o cestodos). En materia fecal no se detectaron huevos. Los leucocitos periféricos y los huevos de nematodes y trematodes hallados in utero pudieron ser clasificados correctamente mediante análisis multivariado no supervisado (componentes principales) empleando como variables valores morfométricos y/o de tiempo de vida media y longitud de onda de autofluorescencia natural. La abundancia de enteroparásitos y su relación concomitante con leucocitos periféricos podrían ser buenos biomarcadores para futuros estudios de poblaciones urbanas y rurales de murciélagos. Para tal fin, se pudo aplicar exitosamente una nueva técnica para tinción hematológica y otra para parásitos intestinales basadas en microscopía de fluorescencia confocal.