INVESTIGADORES
SANCHEZ Romina Magali
informe técnico
Título:
ITA2-PICT
Autor/es:
SÁNCHEZ ROMINA MAGALÍ
Fecha inicio/fin:
2018-02-06/2019-02-05
Páginas:
1-7
Naturaleza de la

Producción Tecnológica:
Biológica
Campo de Aplicación:
Sanidad vegetal
Descripción:
Identificación Multigénica de las especies de Alternaria presentes en plantas nativas de interés agrícola o ecológico del sur bonaerense. Debido a los efectos significativamente negativos que causan las especies del género Alternaria en general, y a la necesidad de una identificación precisa de las especies fitopatógenas para el estudio del saneamiento de nuestras plantas nativas y para el control biológico de nativas convertidas en malezas, el presente proyecto propone aplicar un enfoque moderno para la identificación fúngica mediante la incorporación de un estudio multigénico con la secuenciación de seis nDNA loci, a los estudios tradicionales morfológico-culturales. Objetivos: 1) Coleccionar las plantas de interés y en los casos con presencia de síntomas de enfermedad fúngica, registrarlos y describirlos. 2) Estudiar los caracteres morfológicos in planta e in vitro de las especies de Alternaria encontradas sobre plantas nativas del sur de la provincia de Buenos Aires.3) Realizar aislamientos para la extracción del DNA nuclear de las especies halladas y para el depósito de las mismas en un cepario público.4) Extraer el ácido desoxirribonucleico ribosomal del núcleo celular (nrDNA) y amplificar las siguientes regiones para la secuenciación: subunidad pequeña rirbosomal (SSU), subunidad grande ribosomal (LSU), separador transcrito interno (ITS), gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH), segunda subunidad grande de la RNA-polimerasa (RPB2) y el factor de elongación de traducción 1-alfa (TEF1).5) Identificar las especies halladas en el campo y realizar la descripción de las especies nuevas. En el caso de especies previamente registradas confirmar su identidad y ampliar su descripción. Logros: Se hallaron siete especies de Alternaria entre los distintos hospedantes estudiados. Estudios In Planta: Se registraron los sintomas causados en el campo, a ojo desnudo y con lupa de mano, por estas especies y todas las especies fúngicas presentes en las plantas coleccionadas. En el laboratorio se observaron bajo Lupa Binocular y se registraron específicamente el tamaño, coloración y caracteres particulares de las manchas producidas en las plantas por las especies de Alternaria. Se describieron los caracteres microscópicos principales a partir del montaje de las mismas en agua y en lactofenol. Se tomaron fotomicrografías del patrón de ramificación de los conidióforos y también se fotografiaron las células conidiógenas y los conidios, y se registraron sus medidas en el mayor número posible para cada caso. Se pusieron a secar las plantas por el método de colchones y camisas de diario en prensas de madera para el guardado de ejemplares de herbario de referencia en el Herbario BBB. Se cambiaron diariamente los colchones durante el periódo necesario en cada caso. Estudios In Vitro: Se pusieron trozos de hojas afectadas, con una desinfección previa en hipoclorito de sodio 1:10, en cajas de petri con algodón humedecido para producir la proliferación de conidios. Al día siguiente se tomaron los conidios de Alternaria con aguja estéril y se pasaron a cajas de petri con PCA. Estas cajas se colocaron en una cámara de luz fría, con un régimen de 8hs Luz/16hs Oscuridad durante 7 días. Luego se realizó la descripción del crecimiento de la colonia, se tomaron fotografías de las mismas y se repitieron los estudios y registros microscópicos hechos in planta. Se tomaron fotomicrografías de cada carácter y se realizaron dibujos a mano alzada. Se prepararon eppendorfs con agua estéril y en ella se colocaron trozos de agar de las colonias obtenidas con el régimen Luz/Oscuridad. Se guardaron en heladera para ser utilizados, a partir de su activación en OA, para la extracción de DNA el próximo mes de febrero.Balance de objetivos alcanzados: De los cinco objetivos propuestos tres fueron plantaeados para el primer año y se cumplieron en su totalidad. 1) Coleccionar las plantas de interés y en los casos con presencia de síntomas de enfermedad fúngica, registrarlos y describirlos. 2) Estudiar los caracteres morfológicos in planta e in vitro de las especies de Alternaria encontradas sobre plantas nativas del sur de la provincia de Buenos Aires. 3) Realizar aislamientos para la extracción del DNA nuclear de las especies halladas y para el depósito de las mismas en un cepario público.1. Se coleccionaron 4 especies de plantas en dos sitios diferentes del estuario de Bahía Blanca: Atriplex undulata y Cyclolepis genistoides en el Salitral de la Vidriera y Cortaderia selloana y Solanum elaeagnifolium en la Cueva de los Leones. Se realizaron las descripciones de los síntomas casusados por todas las especies de hongos encontradas. 2. Se realizaron los estudios in planta e in vitro de los caracteres morfológicos de 7 especies de Alternaria halladas. Se armaron cámaras húmedas y se pasaron los conidios a cajas de petri con medio de cultivo. Se pudo describir el patrón de crecimiento de las cepas in vitro en un régimen de 8hs Luz/16hs Oscuridad.3. Se realizaron aislamientos para el guardado de las cepas y la extracción del DNA nuclear de las especies halladas. Se prepararon eppendorfs con trozos de agar portando el micelio fúngico, inmersos en agua esteril y se guardaron en heladera.