Desarrollo de un modelo de producción de pectinasas para vinificación en sustrato sólido (SSF)

OSORIO, N. E.; MARGARA, D. D.; CABEZA, M. S.; MORATA DE AMBROSINI, V.I.

Centro de Convenciones Hotel Ariston - Rosario, Santa Fe

Jornada; XIII Jornadas Argentinas de Microbiología; 2008

Asociación Argentina de Microbiología

Se trabajó con la cepa NO18 seleccionada en función de las condiciones propias de la región D.O.C. San Rafael (Mza.), mantenida en el banco de cepas del Laboratorio de Biotecnología de la Facultad de Ciencias Aplicadas a la Inudstria. Se diseñó, en forma preliminar, un proceso de producción de enzimas pectinolíticas por Fermentación en Sustrato Sólido (SSF) a distintos tiempos de incubación. Se obtuvieron esporos nuevos del hongo NO18 sembrando periódicamente en medio de cultivo YEPD (Yeast Extract Peptone Dextrose) incubando 72 horas a 30ºC. Se utilizó orujo de uvas tintas agotadas, deshidratadas, fraccionadas en 10g por placa de Petri, como soporte para la fermentación. Se sembró 1 ml de Tween 80 al 0,1% en agua destilada con 6x105esporos del hongo. Se humedeció al 68% con 20 ml de caldo de cultivo con 0,2% de pectina y 2% de glucosa. Las placas se incubaron en baño de maría en ambiente húmedo a 30ºC, 14 días. Periódicamente se determinó Actividad Acuosa (Aw). El extracto enzimático (EE) se extrajo con 30 ml de una solución buffer ácido acético-acetato de sodio (pH 5) estéril, se filtró, prensó y centrifugó. Se esterilizó con membrana de acetato de celulosa de porosidad 0,22 micrómetros, y se determinó la actividad pectinolítica con ácido dinitrosalicílico (DNS). Se observó un aumento neto en la producción de enzimas hacia los 14 días de incubación (0,1413 UE/ml). Por otra parte, se trabajó con extracto enzimático concentrado NO18, incubado a 30ºC, 3 días, se extrajo el sobrenadante obtenido fitlrando en membrana de acetato de celulosa de 0,45 micrómetros. Se concentró a 50ºC en evaporador rotativo. Se analizaron los productos de reacción, generados por la acción del EE sobre sustrato Ácido Poligalacturónico (APG) y Pectina a pH 5, mediante Cromatografía en Capa Fina (TLC, thin layer chromatography), utilizando como revelador una solución etanólica en ácido sulfúrico y fosfomolíbdico. Se utilizaron patrones Ácido Galacturónico (AG), ÁcidoTrigalacturónico (TG), APG, y monosacáridos. La acción de la enzima sobre APG muestra semejanza con el resultado obtenido sobre Pectina, al observar como productos de degradación, la liberación de AG, indica la presencia de una exopoligalacturonasa.