Evaluación de diferentes métodos de obtención de paredes celulares, b-glucanos y manoproteínas a partir de levaduras vínicas autóctonas

CABEZA, M. S.; FERREYRA, S. G.; SANGORRÍN, M. P.; FLORES, C. A.; ORDOÑEZ, A. L.

Rosario, Santa Fe

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016; 2016

Asociación Argentina de Microbiología (AAM) - Asociación Latinoamericana de Microbiología (ALAM)

Las levaduras son buena fuente de prebióticos (β-glucano y manoproteínas). La industria local podrá ofrecer alimentos que tengan efectos beneficiosos para la salud y dar valor agregado económico a sus productos, incorporando prebióticos. Dentro de este marco general, el objetivo del presente trabajo fue evaluar diferentes técnicas de desintegración celular y de obtención de manoproteínas y β-glucanos a partir de levaduras vínicas autóctonas.Se llevaron a cabo 6 ensayos de desintegración celular y separaciónde la pared celular: a) autolisis; b) ruptura mecánica con esferas cerámicas y ultrasonido; c) ultrasonido con posterior tratamiento a 121°C durante 1,5 hs; d) hidrólisis con NaCl al 4 %; e) hidrólisis con NaOH 0,1 N y f) congelado-descongelado a -40°C; posteriormente se centrifuga (13.000 rpm/4°C/10´) y se lava dos veces con agua destilada para retirar los componentes del citosol. Se asume que los precipitados contienen la pared celular de levaduras. La efectividad de la obtención de paredes celulares y su purificación de los componentes citosólicos fue observada al microscopio con azul de metileno. Se observan diferencias en el tamaño de las células de levadura muertas (inferior al de las células vivas) y también en la cantidad de levaduras muertas. La reducción del tamaño de las levaduras se produce por rotura de la pared y su consiguiente pérdida de citoplasma. Se eligen entonces 2 métodos de disrupción celular: ultrasonido y autolisis para continuar el estudio y determinar mejor extracción de β-glucanos y de manoproteínas.Para separar las manoproteínas se empleó extracción térmica, en donde la suspensión (pH 7,2) se calienta a 85ºC durante 24hs, se centrifuga y se lava 3 veces el residuo (13.000 rpm/4°C/10´). Para separar los β-Glucanos, se ensayaron dos métodos: alcalino NaOH 1 N a 90°C por 2 h; y álcalis-ácido NaOH 1,0N a 80°C por 2 h y Ácido acético 0,5 N a 75°C por 1 h. Posteriormente, se centrifuga y se lava 3 veces el residuo (13.000 rpm/4°C/10´).Se determinaron proteínas solubles por Bradford, azúcares reductores con DNS y glucosa con kit de glucosa enzimática. Se obtuvieron más manoproteínas a partir de las paredes de levadura obtenidas con el tratamiento de autolisis (3,124 mg/ml de manoproteína mojada).La mejor extracción de β-glucano se alcanzó con el método alcalino, a partir de las paredes de levaduras obtenidas por ultrasonido (0,325 mg glucosa/ml de β-glucano mojado). No se logró separar completamente las proteínas del β-glucano, por lo que se ensayarán alternativas de purificación.Se continuará con los estudios de caracterización de los ingredientes prebióticos para incorporarlos en alimentos.