ORGANIZACIÓN GENOMICA DE 5 INHIBIDORES DE LA FAMILIA KAZAL DE TOXOPLASMA GONDII

CÓCERES V.M.; PERALTA L.; ANGEL S.O.

La Plata-Buenos Aires-Argentina

Congreso; I Congreso Panamericano,V Congreso Argentino, II Congreso Bonaerense de Zoonosis; 2006

Sociedad Argentina de Protozoologia

La infección toxoplásmica ocurre principalmente por vía oral, a través de formas con alta resistencia a las proteasas de los jugos gastrointestinales. Los inhibidores de proteasas kazal TgPI-1 y TgPI-2 de T. gondii fueron sugeridos como candidatos a conferir dicha resistencia. El objetivo de este trabajo es identificar otros genes Kazal del parásito y analizar la organización genómica de éstos. Con el rastreo del banco de datos (www.toxodb.org) se detectaron otros tres genes kazal: TgPI-3, TgTwiscan_5223 y TgTwiscan_3410. Un estudio de la organización genómica demostró que TgPI-1 y TgPI-2 se localizan en el cromosoma IB, TgPI-3 en VI, 5223 en X y 3410 en V. Mediante un ensayo de RT-PCR se observó que TgPI-1, TgPI-2 y TgPI-3 se estarían expresando. TgPI-1 y TgPI-2 demostraron estar separados por  2.450-pb, dentro de la cual se encontró otro marco abierto de lectura (TgCyt16). TgCyt16 fue subclonado en un vector de expresión procariota. El anticuerpo producido anti-rTgCyt16 se empleó en ensayos de Western blot e IFI, revelando una banda de 16-kDa en el extracto total de T. gondii, con una localización subcelular citoplasmática. Solapando con el gen TgPI-2, en sentido antisense, se detectó otro gen (TgTwiscan_0895), el cual demostró estar activo (RT-PCR positivo). El análisis de la secuencia aminoacídica indicaría que se trata de un proteína transportadora de Na+ de membrana de la familia SNF. La presencia de 5 genes Kazal, 3 de ellos activos, sugieren un papel importante de esta familia de proteínas. Actualmente se esta caracterizando bioquímicamente a TgPI-3.