INVESTIGADORES
VIOLA Ivana Lorena
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la interacción de ATH1, un factor de transcripción de la familia Bell, con el ADN
Autor/es:
VIOLA I, CHAN R Y GONZALEZ D.
Lugar:
Santa Fe. Santa Fe, Argentina
Reunión:
Congreso; III Encuentro Bioquímico del Litoral y VI Jornadas de comunicaciones técnico-científicas; 2005
Resumen:
El gen ath1 (Arabidopsis thaliana homeobox 1), funcionalmente involucrado en procesos regulados por luz como la de-etiolación, transición floral y respuestas de shade avoidance, codifica para un factor de transcripción perteneciente a la familia BELL de proteínas con homeodominio (HD). El HD es un dominio proteico altamente conservado de 60 aminoácidos que establece contactos especificos con el surco mayor del ADN. En el presente estudio se determinó la secuencia blanco de ADN de ATH1 mediante el método de selección de oligonucleótidos de secuencia al azar (SELEX). A través del apilamiento de las secuencias obtenidas luego de siete rondas de selección y amplificación se pudo determinar que la secuencia de ADN reconocida por ATH1 es 5´-TGACAGGT-3´. A continuación, se realizaron ensayos de unión proteína-ADN in vitro con ATH1 y STM (una proteína perteneciente a la clase I de proteínas con HD de la familia knox) empleando oligonucleótidos conteniendo variaciones de la secuencia consenso de ADN. Estos estudios demonstraron que ambas proteínas reconocen secuencias de ADN similares pero con diferente afinidad y que cambios en las posiciones 2,3 y 4 del núcleo TGAC afectan profundamente la interacción con el ADN. Con el objetivo de analizar en más detalle la interacción de estas proteínas con el ADN se llevaron a cabo experimentos de footprinting e interferencia con radicales hidroxilo, utilizando oligonucleótidos con la secuencia TGACAGGT y TGACAGAA, denominados I y II. Estudios llevados a cabo con homeodominios mutantes en la posición 54 de ATH1 y STM (ATH1-V54K y STM-K54V, respectivamente) mostraron que la identidad de este residuo es determinante en la afinidad de unión al ADN. Además, cambios en las posiciones 5 y 6 de la secuencia TGACAGGT afectan significativamente la interación cuando el residuo 54 es Val, mientras que la identidad de la posición 7 es muy importante para las cuatro proteínas. Estos resultados indican que ATH1 y STM interactúan en forma similar, pero no idéntica, con el ADN y que la presencia de valina o lisina en la posición 54 del HD sería, en parte, responsable de las diferentes propiedades de unión de estas proteínas.