DESARROLLO DE UN MÉTODO ANALÍTICO BASADO EN NANOPARTÍCULAS DE SÍLICA PARA LA DETECCION DE HbA1c ACOPLADO A ELECTROFORESIS CAPILAR.

NARELLA BASSI; DENISE A. GRELLA; HAMER MARIANA

Bariloche

Encuentro; XVII Encuentro de Superficies y Materiales Nanoestructurados; 2017

La determinación de la HbA1c se realiza de manera rutinaria en los hospitales mediante analizadores automáticos basados en métodos de separación por intercambio iónico, afinidad, electroforesis capilar (EC), HPLC o por métodos inmunoquímicos. Estos métodos se caracterizan por su precisión y por su estabilidad a largo plazo, pero no son completamente específicos de la HbA1c, ya que otras especies glicosiladas co-eluyen con HbA1c. Por tanto, los resultados deben referirse a HbAGlc y no HbA1c. El principal objetivo de este trabajo es el desarrollo de un método de EC que permita resolver la problemática de detección de HbA1c utilizando como principal componente de reconocimiento nanopartículas (Nps) de sílica modificadas con ácido borónico.Para ello, se sintetizaron Nps de sílica por hidrólisis y condensación de tetraetilortosilicato (TEOS) en etanol en presencia de amoniaco como catalizador (método de Stober). Las Nps resultantes fueron recubiertas con un derivado del ácido borónico -ácido 4-(trimetilsilil)fenilborónico (TMSFBA)- y se caracterizaron por espectroscopía FTIR, Raman, DLS y microscopía SEM y TEM. Luego las mismas se implementaron en un sistema electroforético en forma de fase pseudo-estacionaria. Las capacidad resolutiva de la fase-pseudoestacionaria se investigó variando el pH del electrolito soporte entre 4,0 y 8,0. Las condiciones de corrida fueron las siguientes: capilar de sílice fundida 75 μm i.d.x 31 cm (27 cm longitud efectiva); 12 kV; 25ºC; detección UV-vis a 415 nm (DAD). Se logró separar eficazmente la HbA1c utilizando las Nps modificadas, utilizando como electrolito soporte buffer fosfato 25 mM pH 6.5. El método muestra una notable estabilidad, pudiendo aplicarse a diferentes fines separativos de glicoproteínas o moléculas con dioles que tengan la capacidad de formar esteres de boronato cíclicos.