Desarrollo de nuevos enzimoinmunoensayos para el serodiagnóstico de la histoplasmosis: rol de la histoplasmina, el galactomanano, el antígeno M recombinante y su fragmento inmunogénico F1.

BRICEÑO FERNANDEZ V; RODRIGUEZ LABOCCETTA C; TOSCANINI MA; VIDELA GARRIDO A; HERMIDA ALAVA KS; ETCHECOPAZ A; POSSE GB; NUSBLAT A; CUESTAS ML

Congreso; . XXI Congreso de la Asociación Panamericana de Infectología (API) - XXIII Congreso de la Sociedad Argentina de Infectología (SADI).; 2023

Objetivos: La histoplasmosis es una micosis sistémica causada por Histoplasma capsulatum. Los pacientes inmunosuprimidos (IS), pueden contraer la forma diseminada de la enfermedad (HD), la cual tiene mal pronóstico y requiere rápido diagnóstico y tratamiento. Los métodos de diagnóstico -tanto convencionales como moleculares y de detección de antígenos (Ags)- aún presentan limitaciones, por lo que deben ser optimizados y asequibles a la mayoría de los laboratorios. Los métodos de diagnóstico serológico disponibles detectan mediante inmunodifusión anticuerpos (Acs) anti-histoplasmina (HMN, mezcla antigénica compuesta por proteínas, hidratos de carbono (HC) y lípidos, de los cuales el galactomanano (GM) es el HC principal y los Ags H y M, las proteínas más abundantes). Esta técnica posee baja sensibilidad (S) en individuos IS. Por ello, nos propusimos desarrollar ensayos de ELISA basados en distintos Ags para el serodiagnóstico de esta enfermedad y determinar la performance analítica de cada uno para poder disponer de un ELISA de detección de Acs con alta S y especificidad (E) y de bajo costo para diagnosticar la histoplasmosis, sobre todo la HD. Metodología: Se estudiaron retrospectivamente bajo aprobación del Comité de Ética del Hospital Posadas (Ref. 260 EMnP0S0/19), sueros provenientes de: 26 pacientes HIV/sida con HD probada y 96 individuos sanos. Para detectar Acs específicos se realizó un ELISA utilizando como Ags HMN comercial, GM levaduriforme (GML), GM micelial (GMM), proteína M entera (M Full) y un fragmento inmunogénico de M, denominado F1. Los Ags M Full y F1 se obtuvieron de forma recombinante en Escherichia coli, y el GM se purificó de la pared celular de ambas fases del hongo mediante un enfoque de eliminación de proteínas que incluyó ultrafiltración, digestión proteica y purificación negativa, obteniendo GM con una pureza ≥ 95%. Para los ELISA, se usó una concentración de Ag de 0,1 µg/well y en todos los casos las muestras de suero y el anticuerpo anti-IgG humana conjugado con peroxidasa, se diluyeron 1:1.000 y 1:10.000, respectivamente con PBS-leche descremada 3%. Se evaluó S y E.Resultados: El ELISA con GML demostró ser el más S (96,1%) y E (94,7%) mientras que los ELISA con M Full y F1 mostraron los menores valores de S (33,3% y 88,8%, respectivamente), y una E de 99,0% y 33,6%, respectivamente. Conclusión: El ELISA que detecta Acs anti-GML constituirá una herramienta útil para diagnosticar histoplasmosis, sobre todo HD con alta S y E.