Adhesión de Lactobacilos a células epiteliales vaginales bovinas

M.C. OTERO; R. OLISCEWSKY; M.E. NADER-MACÍAS

Buenos Aires. Argentina.

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología. X Congreso Argentino de Microbiología; 2004

Asociación Latinoamericana de Microbiología. Asociación Argentina de Microbiología

ADHESION DE LACTOBACILOS A CÉLULAS EPITELIALES VAGINALES BOVINAS.   La capacidad de adhesión a los epitelios es esencial para la colonización de microorganismos a ser empleados como probióticos. Los Lactobacilos pueden proteger frente a patógenos en el tracto urogenital por diferentes mecanismos. Nuestro grupo trabaja en el diseño de un probiótico de aplicación veterinaria para la prevención de la colonización bacteriana descontrolada causante de endometritis bovinas durante el posparto. El objetivo de este trabajo fue evaluar y caracterizar el fenómeno de adhesión de: L. gasseri CRL1412, L. gasseri CRL1421 (fenotipo no agregante) y de L. delbrueckii sp. delbrueckii CRL1461 (agregante) a células epiteliales vaginales. Estos microorganismos fueron seleccionados por sus propiedades de superficie e inhibición de patógenos bovinos. El ensayo de adhesión se realizó incubando suspensiones bacterianas con células epiteliales vaginales bovinas, lavadas y resuspendidas en Medio Esencial Mínimo de Eagle (MEM, Gibco) en concentración de 2.5X105 células/ml. Las bacterias fueron lavadas con solución fisiológica y resuspendidas en MEM hasta 107 bacterias/ml. Las condiciones de incubación fueron 1h. con agitación suave, a 37°C y pH 4.5 y 7. Las bacterias no adheridas se removieron con 3 lavados con MEM por centrifugación a 800 rpm. Los adhesión se evaluó por observación directa (coloración de Gram) y por microscopía electrónica de barrido. La naturaleza química de los factores involucrados se determinó tratando previamente las bacterias con periodato de Na+, tripsina, proteinasa K y lipasa. Los patrones de adhesión observados en fresco por microscopía de fluorescencia (bacterias coloreadas con naranja de acridina) fueron diferentes en cada microorganismo y coincidentes con el fenotipo de agregación. L. gasseri CRL 1412 y CRL 1421 adhieren en mayor grado a pH 4.5 que a pH 7, siendo el índice de adhesión el parámetro más sensible. L. delbrueckii sp. delbrueckii CRL 1461 es el más adherente con índices altos sin que se observen diferencias respecto del pH, y en segundo lugar L. gasseri CRL 1412. En las tres cepas se determinó que los factores bacterianos involucrados en la adhesión son de naturaleza glicoproteica. L. gasseri CRL 1412 y CRL 1421 incrementan la adhesión por efecto de las proteasas empleadas. Solamente L. gasseri CRL 1412 pareciera tener una estructura proteica del tipo de capa S, por que la adhesión fue sensible al tratamiento con SDS 2%. Los resultados obtenidos permiten profundizar en el conocimiento de los mecanismos involucrados en la capacidad de adhesión de lactobacilos a células epiteliales vaginales, para su posterior empleo como probióticos bovinos. Estos productos podrían actuar en la prevención de endometritis, que afectan fertilidad y por lo tanto la productividad de la explotación ganadera.