Identificación de intermediario acil-enzima de la lipasa B de Candida antarctica

MARÍA VICTORIA TOLEDO; SEBASTIÁN E. COLLINS; CARLOS R. LLERENA SUSTER; LAURA E. BRIAND

Montevideo

Simposio; II Simposio Latinoamericano de Biocatálisis y Biotransformaciones; 2016

Las lipasas (EC 3.1.1.3, triacilglicerol hidrolasas) son enzimas hidrolíticas cuya función biológica en bacterias, hongos, plantas y animales superiores, es catalizar la hidrólisis de triglicéridos para obtener ácidos grasos libres y glicerol. Estas enzimas son de gran utilidad en varias reacciones y procesos industriales debido a su habilidad de catalizar las reacciones inversas de esterificación, transesterificación e interesterificación [1]. La industria farmacéutica aplica la enantioselectividad de las lipasas para preparar fármacos que contienen un centro quiral. Entre las drogas racémicas, los ácidos 2-arilpropiómicos son mezclas racémicas pertenecientes a la familia de antiinflamatorios no esteroideos (AINEs) cuya actividad farmacológica reside principalmente en el enantiómero S(+) [2]. En los últimos 20 años, las lipasas han sido ampliamente utilizadas en la resolución cinética de estas mezclas racémicas con el objetivo de obtener ácidos S(+)-2arilpropiónicos puros. La lipasa B de Candida antarctica (CALB) ha sido una de las más usadas. El sitio activo de CALB es una triada catalítica compuesta por Serina (Ser) 105, Ácido Aspártico (Asp) 187 e Histidina (His) 224, y contiene un hueco oxianiónico formado por Treonina (Thr) 40 y Glutamina (Gln) 105 [3]. El mecanismo de acción de esta enzima ha sido descripto como Ping Pong Bi Bi con la formación de dos intermediarios tetraédricos y un complejo acil-enzima [4]. En este trabajo, las especies moleculares involucradas en el complejo acil-enzima entre el R/S-ketoprofeno y la lipasa B de Candida antarctica se estudiaron mediante ATR-FTIRin situ resuelta en el tiempo.