INVESTIGADORES
LLERENA SUSTER Carlos Rafael
congresos y reuniones científicas
Título:
Investigación de la estructura y actividad proteolítica de papaína en medios acuoso orgánicos homogéneos a distintas temperaturas
Autor/es:
CARLOS R. LLERENA SUSTER; CARLA JOSÉ; SEBASTIÁN COLLINS; LAURA E. BRIAND; SUSANA R. MORCELLE
Lugar:
La Plata
Reunión:
Encuentro; V Encuentro Regional de Biocatálisis y Botransformaciones; 2012
Institución organizadora:
SAByB
Resumen:
Se estudió la estabilidad de papaína en mezclas acuoso-orgánicas mediante
determinaciones de actividad residual y distintos análisis espectroscópicos (fluorescencia y FTIRATR). Los sistemas investigados contenían acetonitrilo (ACN), metanol (MeOH) y dimetilformamida (DMF) con 1 ó 10% (V/V) de buffer acuoso (pH 8,0). Se evidenció que, en presencia de ACN, la papaína retiene prácticamente toda su actividad catalítica luego de 24 h. de incubación a 298 K y que, al mismo tiempo, adquiere una conformación más compacta. En MeOH, en cambio, la papaína sufrió una importante pérdida de actividad (80%) después de 24 h de incubación a 298 K, pero no se observaron cambios importantes en su estructura secundaria. Esto sugiere que los cambios se localizaron cerca del sitio activo. En DMF se observó una pérdida total de actividad, comprobándose la aparición de cambios irreversibles en su estructura mediante espectros de fluorescencia, y un incremento moderado en las estructuras lámina b y giros b, evidenciados mediante los análisis por FTIR-ATR. En todos los casos se observó que los solventes orgánicos produjeron una estructura más rígida y compacta en la papaína. Estas modificaciones afectarían el sitio activo en los casos de MeOH y DMF. Por otra parte, se analizaron los efectos del calentamiento a 353°K sobre la estructura secundaria. No se encontraron diferencias apreciables en el contenido de hélices a y láminas b, cuando el solvente es buffer acuoso, mientras que en las mezclas con ACN se observó una leve disminución en ambas estructuras y un aumento en los agregados. En MeOH y DMF, sin embargo, se pudo demostrar que las estructuras hélices a son menos estables con la temperatura que las láminas beta y que cambian a estructuras agregadas.
