INVESTIGADORES
MUCHNIK Rosa
congresos y reuniones científicas
Título:
Síntesis de sustratos aceptores para el estudio de alfa1-3-manosiltransferasa AceA de Acetobacter xylinum.
Autor/es:
BARRIOS, P; MUCHNIK DE LEDERKREMER, R; IELPI, L; MARINO, C
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; XV SINAQO; 2005
Resumen:
Las glicosiltransferasas (GTs) son agentes clave en la formación de
carbohidratos bioactivos, y poseen la ventaja de presentar alta especificidad. La
enzima bacteriana á1-3 manosiltransferasa AceA participa en la síntesis del
exopolisacárido acetano producido por Acetobacter xylinum. AceA cataliza la
transferencia de un residuo manosa desde GDP-Man a la glucosa terminal de
poliprenilpirofosfatocelobiosa, con retención de la configuración anomérica.1 La
estructura de la porción lipídica del sustrato natural no ha sido elucidada, aunque se
sugirió que sería un poliisoprenol de aproximadamente 11 a 15 unidades. Dado que
su aislamiento en las cantidades necesarias para los estudios de caracterización de
la enzima y síntesis de neoglicoconjugados es dificultosa, hemos encarado la síntesis
de probables sustratos. Para estudios cinéticos de algunas GTs se han utilizado
como sustratos análogos de poliisoprenol, conteniendo cuatro unidades
isoprenoides.2 Con el objeto de caracterizar AceA, sintetizamos como sustrato fitanil
difosfato celobiosa (1).
Si bien 1 se comportó como aceptor se encontró que la enzima se une con baja
afinidad (Km = 3.2 mM) mientras que se une con alta afinidad al sustrato dador GDPMan
(Km = 35 µM).3 Este resultado motivó la necesidad de sintetizar sustratos con la
porción lipídica insaturada para determinar si la baja afinidad se podía atribuir a la
diferencia estructural entre el fitanol y el isoprenol natural. Dado que la secuencia
sintética utilizada para 1 involucraba etapas de hidrogenación catalítica, incompatibles
con la presencia de instauraciones en la porción lipídica, fue necesario utilizar una
nueva metodología para la introducción del grupo fosfato. Los mejores resultados se
obtuvieron utilizando nBu4NH2PO4.4
Se describe la síntesis de 2-4, su caracterización, y su utilización en la reacción
mediada por AceA.
