Estudio de la expresión del gen MraW en Escherichia coli

FERRERAS J, AYALA J

Madrid

Congreso; Tercera Reunión Científica del Grupo de Microbiología Molecular de la Sociedad Española de Microbiología; 2000

Sociedad Española de Microbiología

El agrupamiento génico dcw (division and cell wall) se localiza en el minuto dos del cromosoma de E. coli y codifica para genes involucrados en la división celular en la síntesis del peptidoglicano. tiene cerca de 20 kb, y su regulación es compleja. Existen varios promotores potenciales de los cuales solo a algunos se le ha probado actividad, siendo el primero de ellos, Pmra, esencial. Solo se han encontrado dos termnadores funcionales de transcripción, uno en 5' y el otro en 3'. Esto supone la existencia de transcritos policistrónicos que comenzarían en cada promotor funcional y que terminarían en la señal de paradad el extremo 3' del agropamiento.Debido a la esencialidad de los procesos de división y de síntesis del peptidoglicano, es de vital importancia conocer como los genes están regulados dentro del agrupamiento. El gen MraW de E. coli se encuentra localizado dentro de dcw, posee un promotor potencial y secuencias 5' que podrían regular su expresión. La función de MraW en el ciclo celular aún no se conoce, aunque parece claro su actividad metiltransferasa. En este trabajo se muestra la expresión de este gen a nivel transcripcional y traduccional mediante técnicas de Northern y Western Blot en diferentes mutantes. También se muestra la influencia del promotor Pmra en la expresión de MraW en mutantes cuyo promotor Pmra se cambio por el promotor Plac, lo que hace que el crecimiento celular sea dependiente de IPTG.El análisis del ARN reveló un mensajero policistrónico superior a 7kb, quedando por determinar el inicio de dicho transcrito. El análisis y la cuantificación de MraW mostró como la etapa de crecimiento, la concentración salina del medio, la activación de la respuesta SOS o el bloqueo en la replicación, modifican positiva o negativamente los niveles de esta proteína, dependiendo del fondo genético de la estirpe. En el análisis de la influencia del promotor Pmra tras la deprivación del IPTG en estirpes dependientes se comprobó que esta proteína ya no se detecta tras solo 1,8 generaciones sin inducción.