TRANSFORMACIÓN GENÉTICA DE LENTEJA (Lens culinaris MEDIK) MEDIADA POR Agrobacterium tumefaciens

BERMEJO, CAROLINA J; RODRÍGUEZ, GUSTAVO RUBÉN; COINTRY, ENRIQUE LUIS

Bariloche

Congreso; XLIII Congreso Argentino de Genética - IV Reunión Regional SAG-La Pampa Patagonia; 2014

Sociedad Argentina de Genética

Los estudios de transformación genética en lenteja son escasos y con bajas eficiencias de transformación (0,14-2,3%). Como objetivo se planteó desarrollar un protocolo de transformación genética altamente eficiente. El sistema desarrollado se basó en la transformación mediada por Agrobacterium con la cepa GV2260 conteniendo el plásmido pBI121 para introducir los transgenes nptII y gus en nudos cotiledonares de lenteja y en la selección de tallos transgénicos con el agente selectivo kanamicina. Para definir la dosis de kanamicina óptima se ensayaron distintas concentraciones (25 a 150 mgL-1) en medios de regeneración in vitro, siendo la escogida la de 50 mgL-1 ya que produjo un nivel de escapes aceptable (20%) y no afectó la regeneración de tallos y raíces. Se co-cultivaron 100 nudos cotiledonares con Agrobacterium de los cuales 14 fueron capaces de regenerar tallos vigorosos en el medio selectivo, indicando su resistencia a kanamicina y su potencial naturaleza transgénica. La expresión estable del gen gus se detectó mediante ensayo histoquímico en las hojas de estos tallos de los cuales 7 dieron positivo. La integración del gen nptII en el genoma de la planta fue confirmada por amplificación mediante PCR. La detección de un fragmento de 700 pb en los 14 explantos potencialmente transformados indicó la presencia de nptII en el ADN genómico de los tallos regenerados y la ausencia de escapes, dando una eficiencia de transformación del 14%. Este método podría ser aplicado en un futuro para la introducción de genes candidatos útiles en lenteja.