Encapsulación del inhibidor de proteasas-adyuvante (U-Omp19) con un antígeno modelo en nano partículas poliméricas

PRADO, LINEIA; PASQUEVICH K; BRUNO LAURA; GUAIMAS, FRANCISCO; CORIA, LORENA; CASSATARO J

Buenos Aires

Congreso; Encuentro de Superficies y Materiales Nanoestructurados (NANO 2023).; 2023

La vacunación es una de las estrategias más utilizadas para prevenir enfermedades infecciosas. Si bien la vía oral es la más elegida para la administración de fármacos, hay muy pocas vacunas aprobadas administradas por vía oral, y la gran mayoría son vacunas inactivadas o atenuadas. Una vacuna oral de subunidad proteica debería superar una serie de obstáculos como; la gran variación de pH en el tracto gastrointestinal, la presencia de proteasas, la respuesta inmune tolerogénica y la gran dilución que sufre la formulación en el estómago e intestino. En nuestro laboratorio hemos demostrado que el inhibidor de proteasas U-Omp19 de Brucella spp. tiene capacidad de adyuvante para formulaciones vacunales administradas por vía oral, incrementando la respuesta adaptativa antígeno (Ag) específica. Si bien la coadministración da U-Omp19 con el Ag puede proteger parcialmente la degradación de este, no puede proteger a la formulación del pH extremo del estómago o de la dilución que ocurre luego en el intestino. Por ello, en este trabajo se desarrolla un método de co-encapsulación de U-Omp19 y el Ag en nanopartículas poliméricas como estrategia para incrementar la protección del mismo y potenciar su inmunogenicidad. Se utilizó PLGA como polímero sintético para generar nanopartículas conteniendo U-Omp19 como adyuvante y ovoalbúmina (OVA) como antígeno modelo. La síntesis de las nanopartículas se llevó a cabo por el método de Doble Emulsión - Solvente Evaporación (DE-SE). La eficiencia de encapsulación (EE) de cada una de las proteínas se determinó de manera directa con electroforesis SDS-PAGE y ELISAS. Se caracterizó las nanopartículas con DLS, SEM y potencial z (Pz). La liberación de las proteínas encapsuladas se evaluó en pH 7,4 por 48 horas. Se utilizaron líneas celulares que modelan el epitelio gastrointestinal como HT29 y Caco-2 para evaluar la citotoxicidad con yoduro de propidio (IP) e internalización del antígeno por citometría de flujo y microscopio confocal. Las nanopartículas obtenidas presentaron una eficiencia de encapsulación de entre 20-60% de las proteínas. Además, se comprobó que U-Omp19 mantiene su capacidad de inhibición parcial de la actividad de proteasas luego de su encapsulación. La caracterización de las nanopartículas reveló que poseen un diámetro hidrodinámico de 328 a 744 nm con un PDI de -0,21 a -0,29 y el Pz varió de -8,2 a -32 Mv. La citotoxicidad máxima fue entre 10-13%. Resultados preliminares indican un incremento de la internalización del antígeno encapsulado en comparación con antígeno libre en células epiteliales. En conclusión, se optimizó un método para obtener nano partículas poliméricas que encapsulan antígenos y adyuvantes proteicos.