Cuantificación de Asparagina en Cultivos Celulares con Electrodos Compósito de Nanotubos de Carbono Modificados con Cobre

LOPEZ RODRIGUEZ, MARÍA LORENA; LUQUE, GUILLERMINA; MADRID, ROSSANA ELENA; FELICE, CARMELO JOSÉ.; FERREYRA, NANCY F.; GIACOMELLI, CLAUDIA E.; RIVAS, GUSTAVO A.

Bahia Blanca, Argentina

Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SUR

Algunos medios de cultivo líquidos utilizados frecuentemente en cultivos celularesutilizan asparagina (Asp) y glucosa (Glu) como fuentes de nitrógeno (N) y de carbono(C), respectivamente(1). En estudios de actividad de Streptomyces sp. M7 (SM7)realizados por impedancimetría, se encontró que la Asp se comporta como uninterferente ya que se observaron respuestas similares para cultivos en medio mínimolíquido (MM) en presencia y en ausencia de la fuente de C.El objetivo de este estudio es dilucidar si la SM7 efectivamente consume Asp tantocomo fuente de N como de C. La determinación de Asp se efectuó amperométricamenteutilizando electrodos compósitos de nanotubos de carbono modificados conmicropartículas de cobre. La principal ventaja que presenta este sensor es lacuantificación de aminoácidos independientemente de su electroactividad y sinnecesidad de derivatización previa(2).Se realizaron cultivos de distintas concentraciones iniciales de SM7 en MM con Asp3,33 mM en presencia y ausencia de Glu a 30°C sin agitación. Las muestras se tomaroncada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -18oChasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió pormétodo de Trinder(3). Para la cuantifiación de Asp residual se empleó amperometría contransporte convectivo controlado, aplicando 0,0V (vs. Ag/ AgCl/ NaCl 3 M) comopotencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado delsobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibradosobtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7 M, preparada en MM,encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó elsensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asppreparadas en “buffer” fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp seconsumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sinembargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo conexperimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume elaminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de laSM7 por impedancimetría se debería reemplazar la Asp por otra fuente de N.